细胞迁移实验技术
—划痕实验
一、 基本原理
细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类 似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞 上，用微量 枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继 续培养细胞至实验设定的时间（例如
72h）,取
出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细 胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某 种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于 划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。 二、 操作步骤
1 .先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大 约每
隔0.5~1cm —道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2. 在孔中加入约5X 105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同， 接
种原则为过夜后融合率达到100%。
3. 第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂 直，
不能倾斜（不同孔之间最好使用同一只枪头）。
4. PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5. 放入37C 5% CO2培养箱，培养。可按0, 6, 12, 24h时间点取 样，
拍照（具体时间依实验需要而定）。
6?统计方法：使用Image J软件打幵图片后，随机划取6至8条水平
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二、注意事项:
1 ?在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞， 影
响实验拍照结果。
2?—般做划痕实验，都是无血清或者低血清（＜2% ）否则细胞增殖就不能 忽
略。
3按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的 检
测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
细胞迁移-划痕实验
