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检验操作规程
题目：王不留行原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20130-02 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/3 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范王不留行原药材检验操作 范围：王不留行原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品呈球形，直径约2mm。 表面黑色，少数红棕色，略有光泽，有细密颗粒状突起，一侧有1凹陷的纵沟。质硬。胚乳白色，胚弯曲成环，子叶2。气微，味微涩、苦。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品粉 3.1.2 末淡灰褐色。种皮表皮细胞红棕色或黄棕色，表面观多角形或长多角形， 直径50～12μm，垂周壁增厚，星角状或深波状弯曲。种皮内表皮细胞淡黄 棕色，表面观类方形、类长方形或多角形，垂周壁呈紧密的连珠状增厚， 表面可见网状增厚纹理。胚乳细胞多角形、类方形或类长方形，胞腔内充 满淀粉粒和糊粉粒。子叶细胞含有脂肪油滴。 （2）薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、硅胶G薄层板、层析缸、甲醇、超声仪、碘化铋钾试液、王不留行对照药材、王不留行黄酮苷对照品、三氯甲烷等。 3.2.2 方法：（2）取本品粉末1.5g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，放 冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。 另取王不留行对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液。再取王不留行黄酮 苷对照品和刺桐碱对照品，加甲醇制成每lml分别含0.2mg和lmg的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述四种溶液各 5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15:7:2）的下 层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹 干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和王 不留行黄酮苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。再置碘 蒸气中熏至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材 色谱和刺桐碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 【检查】 4 水分 不得过12.0％（通则0832第二法）。 4.1 仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。 4.1．1
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4.1.2 4.1.3 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3
方法：取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100－105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中的含水量（%）。 计算公式： W样+W0－W1 水分% = ×100% W样 式中： W0 称量瓶的重量（g）。 W1称量瓶与样品的重量（g）。 W样样品的重量（g）。 总灰分 不得过4.0％（通则2302）。 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： ---------------------------- --------------------------- --------------------------- 第 2 页 共 4 页
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5 5.1 5.2 5.3 6 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5
（V供-V空）×C×0.032×106 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于6.0%。 仪器与试剂：电热鼓风干燥箱、分析天平、蒸发皿、数显恒温水浴锅等。 方法：取供试品约2～4g，称定重量，置100～250ml的锥形瓶中，精密加入乙醇50～100ml，塞紧，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。 计算公式： （W1-W0）×V0 浸出物% = ×100% W样×（1－水分）×V1 式中： W0 ------- 蒸发皿的重量（g）。 W1 -------- 浸出物与蒸发皿的重量（g）。 W样------- 样品的重量（g）。 V0 ------- 加溶媒体积 （ml）。 V1------- 取续滤液的体积 （ml）。 【含量测定】 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，含王不留行黄酮苷（C32H38O19）不得少于0.40%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、甲醇等。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.3%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按王不留行黄酮苷峰计算应不低于3000。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0～10 35 65 10～20 35→40 65→60 20～35 40→50 60→50 对照品溶液的制备 取王不留行黄酮苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约1.2g，精密称定，置 第 3 页 共 4 页
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6.6 6.7 具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含王不留行黄酮苷（C32H38O19）不得少于0.40%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。
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YL-20130王不留行原料检验操作规程
