干燥后停止。
2.2.7 消 毒 剂 对 皮 肤 模 拟 现 场 消 毒 效 果 鉴 定 试 验 2.2.7.1 目 的
用于验证消毒剂对人工污染于皮肤表面细菌的消毒效果。 2.2.7.2 实验器材
（1）实验菌株 金黄色葡萄球菌ATCC 27217，可增加特定细菌进行试验。 （2）培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），见附录A （3）稀释液 见附录A
（4）中和剂溶液 经中和剂经鉴定合格 （5）普通洗手液
（6）金属筒 （直径2.2cm、高度3cm） （7）尼龙刮菌棒 （8）吸管、试管、平皿 （9）电动混匀器 （10）一次性接种环 （11）外用皮肤消炎药膏 （12）皮肤消毒剂 （13）75% 酒精
（14）标准硬水 见附录A （15）恒温培养箱 2.2.7.3 试验步骤
（1）菌悬液的制备按2.1.2.3进行。
（2）用普通洗手液清洗志愿者前臂内侧 1min，用自来水冲净残留洗手液，用无菌纸、巾擦干，以去除前臂内侧表面自然菌。
（3）在志愿者的双前臂内侧中段，用带有印墨直径为 3.00cm 的玻璃筒扣在皮肤上，划分出试验区。
（4）使用加样器取 10μL 菌悬液，滴加于前臂试验区（使回收菌落数为 2310cfu/试验区～1310cfu/试验区），用一次性接种环把菌悬液涂成圆形，其边缘应与印墨有 4mm～5mm 的距离，使其在空气中自然干燥。
（5）根据消毒剂使用说明书规定的方法对右前臂内侧进行消毒，一般设定作用时间为1min～3min，最长5min。
（6）作用至规定时间，用中和剂溶液对前臂上涂菌的区域进行取样。采样时，将金属筒放置于试验区中间部位，罩住染菌区，不要接触到盖有印墨的边缘。将 1.0mL中和剂溶液吸移至金属筒内，用尼龙刮菌棒刮洗金属筒罩住区域内的皮肤60s，将筒内液体吸移至试管内，再加
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1.0mL中和剂溶液对该区域内的皮肤进行第二次刮洗 30s，将第二次擦洗的液体，注入含第一次刮洗液体的试管中，作为试验组样本。
（7）以标准硬水代替消毒剂对左前臂做同样处理，用稀释液做适当稀释，取适宜稀释度作为对照组样本。
（8）将阳性对照组和实验组样本，分别取 1.0mL，以倾注法接种平皿，每个样本接种 2 个平皿，置 37℃恒温培养箱中培养48h，观察最终结果。
（9）将本次试验未用完的同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭、培养基等分别设阴性对照。 （10）计算杀灭对数值。 （11）试验不得少于 15 人次。 2.2.7.4 评价规定
阴性对照组无菌生长，阳性对照组回收菌落数为2310cfu/试验区～1310cfu/试验区，且对每一人次皮肤表面人工污染的金黄色葡萄球菌的杀灭对数值 均 ≥3.00，判定为消毒合格。 2.2.7.5 注意事项
（1）志愿者录用标准 1）年龄介于18岁至65岁； 2）志愿者身体健康；
3）前臂皮肤完好无损且没有皮肤病及其它皮肤问题。
（2）排除志愿者的标准，如果志愿者有下列情况之一，不能被录用参加试验 1）孕妇；
2）诊断患有糖尿病、各种传染病、器官移植者。
（3）试验采样结束后，先用75%的酒精对志愿者前臂进行消毒，然后用皮肤消毒剂对双前臂进行消毒处理，处理后清水冲洗，擦干，再涂少量的抗生素软膏于试验区，以防皮肤感染。
（4）在试验完成后的 48h～72h 内，志愿者如发现前臂上有小脓疱、水疱，隆起的红色痒疱，应及时通知检验单位。
2.2.8 消毒剂对皮肤现场消毒效果鉴定试验 2.2.8.1 目 的
用于验证消毒剂对皮肤表面细菌的消毒效果。 2.2.8.2 实验器材
（1）中和剂溶液 经中和剂经鉴定合格 （2）培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA） （3）稀释液 见附录A （4）标准硬水 见附录A
（5）规格板（用牛皮纸制备，中央留一3.00cm310.0cm的空格作为采样部位）121℃ 15min灭菌备用
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（6）无菌棉拭 （7）电动混匀器 （8）吸管、试管、平皿 2.2.8.3 试验步骤
（1）随机选定志愿者，试验不少于30人次。
（2）让志愿者将左右前臂内侧中段相互充分对搓，将规格板放于志愿者左前臂内侧中段表面，用无菌棉拭在含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，在规格板框定的区域内，横向往返涂擦3遍，纵向往返涂擦10遍，每涂擦一遍，将棉拭转动一次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，电动混匀器振荡混匀20s，或在手掌振打200次，用稀释液作适当稀释，取适宜稀释度作为阳性对照组样本。
（3）按消毒剂使用说明书的方法对右前臂内侧进行消毒，一般设定作用时间为 1min～3min，最长不超过 5min。作用至设定时间用中和剂溶液代替稀释液，与阳性对照组同样的方法对志愿者右前臂内侧表面残留的自然菌采样一次，作为试验组样本。
（4）将阳性对照组和试验组样本，分别取1.0mL，以倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，置37℃恒温培养箱中培养 48h，观察最终结果。
（5）将本次试验未用完的同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭、培养基等分别设阴性对照。 （6）以手为单位计算杀灭对数值。 2.2.8.4 评价规定
阴性对照组无菌生长，阳性对照组有较多细菌生长，30人次皮肤表面自然菌的平均杀灭对数值≥1.00，判定为消毒合格 。 2.2.8.5 注意事项
（1）本试验需有志愿者参与，重复人次较多，一人可多次受试，但不得在一批试验或同日反复参与，否则可影响结果的准确性。
（2）志愿者试验时，不得触摸任何表面，以免使试验部位沾染杂菌。
（3）棉拭涂抹采样，较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，以及洗菌时敲打的轻重等先后保持一致。 （4）擦拭消毒时，要依据说明书适量均匀涂抹。
（5）现场样本须及时检测，常温运送、存放不得超过2h，4℃冰箱存放不得超过4h。 2.2.9 消毒剂对其他物体表面模拟现场消毒效果鉴定试验 2.2.9.1 目 的
用于验证消毒剂对人工污染于一般物体（指除本规范已有专门规定如食（饮）具、医疗器械等以外的物体）表面细菌的消毒效果。 2.2.9.2 实验器材
（1）实验菌株 大肠杆菌（8099）可增加特定细菌进行试验。菌悬液按2.1.2制备
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（2）中和剂溶液 经中和剂鉴定试验合格 （3）稀释液 见附录A
（4）培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基，见附录A （5）标准硬水 见附录A
（6）规格板（用不锈钢材料制备，中央留一 5.00cm35.00cm的空格作为采样部位）
（7）无菌棉拭 （8）电动混匀器 2.2.9.3 试验步骤
（1）一般以木制桌面为代表进行人工染菌，也可以特定的实物为染菌对象。每次试验，各类物品表面测试30个样本。
（2）染菌时，选物品较平的部位，于规格板中央空格，用无菌棉拭沾以菌悬液均匀涂抹。待自然干燥后进行试验。每次试验设2个区块作为阳性对照区，10个区块为试验区。 （3）将无菌棉拭在含10mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干，对对照组区块涂抹采样，每区块横竖往返各8次。以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内， 电动混匀器振荡20s，或在手掌上振打200次，用稀释液做适当稀释后，作为阳性对照组样本。
（4）按说明书中的方法和使用剂量对物体表面进行消毒。将无菌棉拭在含10mL中和剂溶液试管中浸湿，于管壁上挤干，消毒作用至设定时间时，分别对消毒区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂溶液试管内，电动混匀器振荡20s，或在手掌上振打200次，作为试验组样本。
（5）将阳性对照组和试验组样本，分别取1.0mL，以倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37℃恒温培养箱中培养48h， 观察最终结果。
（6）将本次试验未用完的同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭、培养基等分别设阴性对照。 （7）试验重复3次。 （8）计算平均杀灭对数值。 2.2.9.4 评价规定
阴性对照组无菌生长，阳性对照组检测菌量为 2.5310cfu/样本～1.25310cfu/样本，30个样本的平均杀灭对数值≥3.00，判定为消毒合格 。 2.2.9.5 注意事项
（1）阳性对照组和试验组应在相邻的区域，但不得在同一区内进行试验。
（2）棉拭涂抹采样较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量， 洗菌时敲打的轻重等等先后一致。
（3）现场样本须及时检测。室温存放不得超过2h，4℃冰箱存放不得超过4h。 2.2.10 消毒剂对其他物体表面现场消毒效果鉴定试验 2.2.10.1 目 的
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用于验证消毒剂对一般物体（指除本规范已有专门规定如食（饮）具、医疗器械等以外的物体）表面自然菌的消毒效果。 2.2.10.2 实验器材
（1）中和剂溶液 经中和剂鉴定试验合格 （2）稀释液 见附录A
（3）培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基 见附录A
（4）规格板（用不锈钢材料制备，中央留一 5.00cm35.00cm的空格作为采样部位） （5）无菌棉拭 （6）电动混匀器 2.2.10.3 操作程序
在使用现场，按说明书介绍的用量、作用时间、使用频率和消毒方法消毒物体表面，检测样本数应≥30份。
（1）在物体表面（桌面、台面、门等）用规格板标定 2 块相邻的面积各为 25cm的区块，一供消毒前采样，一供消毒后采样。
（2）将无菌棉拭在含 10mL 稀释液试管中浸湿， 于管壁上挤干，对对照区块涂抹采样，横竖往返各 8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，电动混匀器振荡20s或在手掌振打200次，做适当稀释后，作为阳性对照组样本。
（3）按说明书中的方法和剂量对物体表面进行试验。将无菌棉拭在含 10mL 中和剂溶液试管中浸湿，于管壁上挤干，消毒作用至设定时间，对消毒区块涂抹采样，横竖往返各 8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂溶液试管内，电动混匀器振荡20s或在手掌振打200次，作为试验组样本。
（4）将阳性对照组和试验组样本，分别取 1.0mL，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，置 37℃ 恒温培养箱中培养 48h，每日观察并记录最终结果。
（5）将本次试验未用完的同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭、培养基等分别设阴性对照。 （6）计算杀灭对数值。 2.2.10.4 评价规定
阴性对照组应无菌生长，阳性对照组应有较多细菌生长，消毒样本的平均杀灭对数值≥1.00，判定为消毒合格。 2.2.10.5 注意事项
（1）在现场试验中，自然菌的种类复杂，平板上常出现大面积霉菌生长，导致无法计数菌落。在两个平行的平板中如有一个平板可数清菌落数时，即按该平板菌落数计算结果。如两平板均有大面积霉菌生长，应重新进行试验。
（2）阳性对照组和试验组应在相邻的区域，但不得在同一区内进行试验。
（3）棉拭涂抹采样较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，
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消毒技术规范（2008年版）
