系统性红斑狼疮患者外周血Th17与Treg细胞及相关细胞
因子表达的研究
李 志1，杨婷婷1，李文哲2，王 青1，王 波1，徐维家1
【摘 要】目的检测系统性红斑狼疮（SLE）患者辅助性T细胞17（Th17）和调节性T细胞（Treg）与其相关细胞因子在外周血中的表达。方法选择38例SLE患者，根据病情严重程度SLEDAI评分进行分组；使用流式细胞仪检测38例SLE患者和对照组Th17和Treg细胞的数量；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中相关细胞因子的表达。结果SLE患者外周血中Th17细胞及其相关细胞因子IL－17、IL－23和IL－6显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），且疾病活动组的表达也显著高于非活动组（P＜0.05）；此外与对照组相比，SLE非活动组Treg的表达降低（P＜0.05），并且疾病活动组的表达也低于非活动组（P＜0.05）；SLE活动组细胞因子TGF－β的表达高于非活动组和对照组（P＜0.05）。结论SLE患者外周血中Th17细胞及其相关细胞因子表达水平显著升高，而Treg细胞的表达降低，两者平衡被打破，提示Th17／Treg的失衡可能在SLE发病机制中发挥重要作用。 【期刊名称】中国实验诊断学 【年(卷),期】2015(000)002 【总页数】3
【关键词】系统性红斑狼疮；辅助性T细胞17；调节性T细胞；白细胞介素17；白细胞介素23；白细胞介素6；生长转化因子－β （Chin J Lab Diagn，2015，19：0253）
系统性红斑狼疮（SLE）是一种常见的自身免疫性疾病，可累及多系统多器官。
T淋巴细胞介导的自免反应在SLE病程过程中起了重要的作用。在不同的细胞环境中CD4＋T细胞可分化为不同的T淋巴细胞亚群，其中辅助性T细胞17（Th17）和调节性T细胞（Treg）在SLE发病过程中尤为重要［1］。本研究通过检测SLE患者外周血Th17、Treg两种T细胞亚群与其相关因子IL－17和TGF－β等的表达水平，探讨Th17与Treg细胞平衡及其在SLE发病中的意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源
选取患者组为大连市中心医院2011年5月至2012年5月的门诊和住院SLE患者共38例，其中男5例，女33例，年龄22－56岁，平均（36.2± 12.51）岁；SLE的诊断符合美国风湿病学会1997年制定的SLE分类诊断标准［2］，平均病程（5.14± 4.56）。根据SLEDAI评分将患者分为活动组（≥10分）22例和非活动组（＜10分）16例。21名健康者作为对照组，平均年龄（40.35±10.21）岁。 1.2 主要试剂
CD3－FITC，CD4－PC5，CD4－FITC，CD25－PC5单抗、固定破膜剂IntraPrepTM购自美国Beckman公司；PE－IL－17，PE－Foxp3单抗及对照购自美国eBioscience公司；Foxp3Perm Buffer（10×）、Foxp3 Fix／Perm Buffer（4×）购自BioLegend公司；刺激剂PMA、离子霉素Ionomycin、莫能霉素monensin购自美国Sigma公司；IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β的ELISA试剂盒购自美国R＆D公司。 1.3 标本采集和处理
受检者清晨空腹静脉采血两份于肝素钠抗凝管中：其中一份用于Treg细胞的检测和密度梯度离心法Ficoll分离PBMCs后对Th17细胞的检测；另一份离心保留血清用于ELISA试验检测细胞因子。 1.4 实验方法
1.4.1 Th17细胞和Treg细胞的流式检测
将分离出的外周血单核细胞及对照组加入CD3和CD4的酶标抗体进行表面标记，用于Th17细胞的标记；将标记后的PBMCs标本用RPMI－1640培养液洗涤，并加入到特殊培养液中（含新生牛血清、刺激剂等），放入37°温箱孵育18－20h。培养后的细胞及对照组进行固定破膜之后加入酶标IL－17抗体和对照抗体，避光孵育30min后PBS洗涤。
取外周全血200μl及对照组加入CD4和CD25的单抗，用于Treg细胞的标记；将标记好的全血样本用PBS洗涤后，进行固定破膜。最后加入酶标FoxP3抗体进行细胞内细胞因子的标记，对照管加入FoxP3对照抗体，孵育30min。最后，应用流式细胞仪测定标记细胞的荧光强度。
1.4.2 ELISA检测血清中IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β的含量
对于IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β的测定要严格按照ELISA试剂盒说明书操作。 1.5 数据处理
用SPSS19.0统计软件进行分析，数据以“均数±标准差（s）”表示，两组间数据用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组外周血中Th17、Treg细胞的表达
系统性红斑狼疮患者外周血Th17与Treg细胞及相关细胞因子表达的研究
