重组人蛋白细胞因子的使用常见问题 - 细胞因子 - MedChemExpress
1． 重组蛋白分类
A. 按蛋白分类 a. 细胞因子 (Cytokines) b. 生长因子 (Growth Factors) c. 趋化因子 (Chemokines) d. 激素 (Hormones) e. 神经营养因子 (Neurotrophins) f. 酶 & 酶抑制剂 (Enzymes & Inhibitors) g. 其他 (Others) B. 按种属分类
2．重组蛋白表达体系
MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物
f. 狗 (Canine) g. 牛 (Bovine) h. 其他(Others) B. 按种属分类 a. 人 (Human) b. 小鼠 (Mouse) c. 大鼠 (Rat) d. 猴 (Rhesus Macaque) e. 猪 (Porcine) 细胞。
3．重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测 定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测 定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
4．重组蛋白运输状态
MCE 的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用 蓝冰或是室温运输。
5．重组蛋白表达体系对比
优缺点 繁殖快、成本低，产量高，但不能进行原核体系 糖基化修饰，常为包涵体 结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后哺乳动物细胞 加工，活性更好，但表达水平较低，周期长，技术要求高 易操作，蛋白背景弱，适合大规模生产，酵母细胞 便于纯化，但存在产量不高以及糖基化表达体系 达不到要求等问题 功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势，但糖基化程度昆虫细胞 低，形式比较单一，活性不如哺乳动物细胞表达系统
6．重组蛋白表达体系选择 研究目的 蛋白要求 纯度>80%，不需要蛋白用作抗原，获得特异性抗修饰或天然活性，可带标原核表达体系 体 签 2/3 是原核表达体系，1/3 用于检测蛋白质结晶及晶体结构研究 纯度>95%，浓度通常在 是昆虫细胞表达体系与10 mg/mL 哺乳动物细胞表达体系 需要保存蛋白的天然活蛋白的功能研究 性 一般要求尽量保存天然用于药物研究的蛋白质 序列，具有天然活性
7重组蛋白开盖使用前处理
真核表达体系 达体系 原核表达体系和真核表最适表达系统
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保 证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
8．重组蛋白复溶
a. 使用前先离心(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白 收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。大 多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于 100 μg/mL，以便于 后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心 数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
9.重组蛋白储存
由于每次冻融都会造成蛋白的部分变性，因此建议客户收到产品后适量分 装避免反复冻融。 a. 短期储存：
冻干粉状态产品在室温下存放 3 周，不影响活性。
复溶后的产品在 4℃ 可稳定储存 1-2 周。 b. 长期储存：
冻干粉状态产品在 -20℃ 下，可稳定保存至少一年；推荐 -80℃ 长期保存， 以获得更稳定性能的产品。
可选择包含一定浓度载体蛋白(0.1% BSA， 5% HSA， 10% FBS，或 5% 海 藻糖)的溶液或培养基复溶产品，分装后冻存于 -20℃ 下，可保存至少三个 月；推荐 -80℃ 长期保存，以获得更稳定性能的产品。
注：分装冻存时，蛋白浓度不低于 100 ng/μL，且每管的体积不可小于 20 μL。
10．载体蛋白介绍
载体蛋白主要用于提升重组蛋白复溶后的稳定性，同时也有利于避免产品 粘附在管壁上。例如：HSA, BSA。
11.重组蛋白标签影响
蛋白标签指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。MCE 的重组蛋白产品大部分为无标签状态，但少数重组蛋白产品因为不同目的 需要加有标签。 a. 标签利于蛋白纯化。
b. 当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行 Western Blot 或
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