埋法,这种方法的操作对微生物细胞的生物活性影响相对较小且操作的方法相对简单,而且其固定微生物细胞的强度高,所以其在目前的研究中具有非常广泛的应用。 3、细菌耐药性产生的原因和检测方法
细菌产生耐药性是为了适应生存环境所以产生了进化,也是药物治疗细菌感染疾病时不能避免所产生的。当抗菌药物与细菌接触的时候会因为各种反应机理来应对抗菌药物的抑菌作用,这时细菌的耐药性就产生了。细菌产生耐药性的原因可能是细菌本身所固有的,也有可能是获得性的,细菌可通过从其他耐药菌中获取耐药基因或者通过基因突变的方式而产生耐药基因。所以可将耐药菌分为固有耐药菌和获得性耐药菌。细菌可通过基因突变在后期对抗生素药物产生耐药,并且细菌在繁殖子代时可将耐药基因传给子代或者其它的菌株,所以细菌耐药性的精准迅速检测是指导我们正确使用抗生素的依据。通过抗生素的合理使用,可使细菌的耐药性周期得到较好的延长,从而可保证抗生素的作用效果。检测细菌的耐药性方法包括传统的药敏试验(AST)、分子生物学技术、电化学方法和MTT比色法。其中分子生物学技术方法包括聚合酶链反应(PCR)、基因芯片和全基因组测序等技术。这些新型的研究方法在检测细菌的耐药性得到了迅猛的发展和较为全面的应用。 4、药物敏感性检测的原理
抗生素与人类疾病的治疗息息相关,所以其研究与开发受到人们的广泛关注。然而,由于滥用抗生素,出现了大量的耐药细菌,对我们的身体健康形成严重威胁,已成为当前不可回避的且急需解决的现实问题。耐药性细菌的出现导致疾病出现了不同程度的变异,所以给疾病的治疗带来了不同程度的困难且治疗耐药性细菌所导致的疾病也会带来巨大的经济负担。所以,为了解决这一问题,人们正在研究新的更快、更灵敏的检测方法。另外,研发抗菌药物,确定疾病以及测试剂量都离不开微生物的参与。所以要采用更快,更灵敏的药物敏感性实验方法来减少研究过程中人力和物力的大量投入。目前,应用最多的药物敏感性实验方法以及细菌耐药检测方法仍是纸片扩散法。这种方法虽然具有较高的准确度与较好的重现性,但检测过程需要大量的时间且操作过程复杂,需要浪费大量的人力物力,无法应对突发性事件。所以在检测细胞活性的众多方法中,光学方法的廉价以及简单受到了人们的追捧。 前人的研究结果发现,通过染料与细胞膜之间所产生的作用,可以很快速和简便的区分出活的细胞和死的细胞。例如中性红以及台盼蓝。通过这些染料穿透细胞膜来呈现出细胞的形态,展现出细胞的生命活力。
PB是亚铁氰化铁钾的配位化合物,它的生物之间的相容性是非常好的。PB在近红外区具有很强吸收和具有非常高的光和热的转换效率。这也使得PB在药物输运、分子影像、基因治疗、光热治疗肿瘤等研究领域受到越来越多人的关注。同时PB作为光学探针也为新的药物敏感性实验提供重要的依据。
实验选择的目标E. coli具有非常短的生命周期,对抗生素具有较好的敏感性且较易于分离纯化。利用光学检测方法的优势,让K3[Fe(CN)6]接受细菌呼吸过程中所产生的电子,然后以其生成物K4[Fe(CN)6]和FeCl3反应所产生的PB作为光学检测的探针,在700 nm处测定其吸光度,观察细菌生物体的活性是如何变化的,来检测抗生素的有效性。 5、本文研究内容及意义
目前,细菌耐药性的问题越来越严重,对临床治疗和患者的人身安全产生非常大的影响。尤其细菌感染是患者病死率高的一个重要原因。虽然体外菌株鉴定和药敏实验为临床医生给细菌感染性疾病患者给以人性化的治疗提供了十分必要参考,在一定的程度上可以减少生病的时间、减少患者的医药费以及降低病死率,但由于从样本开始检验到获得药物敏感性实验报告的时间较长,一般需要两天以上,然而当药物敏感性实验报告产生误差时,可能会延误患者的治疗,以至于导致更严重的后果。所以要想得到更快速、结果更确切的药物敏感性实验报告,除了对收集细菌标本做出严格的要求以及规范细菌的鉴定和药物敏感性试验外,寻求
更快速、简便和准确的药物敏感性实验方法也是十分重要的。
本实验以普鲁士蓝(PB)为光学探针进行吸光度的测定,以大肠杆菌为模型,用于筛选新的抗菌化合物以及对药物的有效性进行快速检测。通过对此方法的可行性进行分析,可得出大肠杆菌的浓度,营养物质以及培养时间对测定药物的有效性的影响,从而确定反应的最佳条件并将其用于抗菌药物的有效性检测,该试验的结果与传统的药物敏感性实验结果具有较好的吻合度。可能其灵敏度比不上肉汤稀释法,但是PB光学测定法的测定时间更短,适用于药物对细菌急性疗效的检测。 参考文献