一、 项目设计简介（三）
项目设计（目标、内容） 口服“复方黄金香提取液”对创伤性脑水肿的 临床应用研究 1. 研究背景： 随着创伤病人增多，我国颅脑损伤发生率超过100/10万人口，接近西发达国家150～200/10万人口的水平，其死亡、伤残率居高不下，总死亡率一直在30%～50%，每年耗费超过100亿人民币。其中继发性创伤性脑水肿（traumatic brain edema，TBE）是导致脑外伤病人伤残和死亡的主要原因之一。TBE发病机制很复杂，其临床表现主要是脑水肿后产生颅高压症状，发生脑疝，严重者死亡。传统以甘露醇脱水利尿为主的综合治疗效果目前仍然欠佳，且甘露醇的副作用大，并发症多。 为此，目前国内外中西医领域都针对TBE开展了积极的研究，已从过去的形态学深入到了分子生物学领域。其中水通蛋白4（aquaporin 4，AQP 4）是近年来研究的热点。有研究发现AQP 4在TBE发生中起重要作用，其表达受多种因素影响。1993年以来，我们对创伤性脑水肿进行了系统的临床观察研究。结合中医辨证论治和现代中西医药的研究，从古今中药方剂（血腑逐瘀汤、桃红四物汤、复元活血汤、补阳还五汤等）中筛选出有效药物，予以重新立法组方取名为“祛瘀通腑汤”。改传统的单纯用甘露醇等脱水利尿为祛瘀通腑（泄泻、通便）、大小便均通畅的新疗法。由于该中药汤剂药效浓度低、杂质多而不纯、煎制麻烦等弊端，故近年我们将“祛瘀通腑汤”改制成提取液口服，其主要药物为黄芪、金银花、麝香、三七、红花、大黄等。并重新命名为“复方黄金香提取液”治疗了大量创伤性脑水肿颅高压病人，获得了良好疗效，先后发表数篇论文于《国外医学神经病学神经外科学分册, 2000]》、《中华中西医杂志,2003》、《湖南医科大学学报,2000》、《中南药学2010》等杂志。 2. 研究目标： 本研究拟通过观察病人症状、体征、影像学变化及该中药对脑脊液、血AQP4表达的影响及上游信号通路（PKC、CaMKⅡ、NF-κB）的调控及时间/疗效的关
系，从而证实口服“复方黄金香提取液”治疗TBE的疗效，以便进一步研发推广。 3. 研究内容： 1) 完善创伤性脑水肿患者病情评估体系，包括病人症状、体征、昏迷评分(GCS)、；颅内压(intracranial pressure，ICP)、脑灌注压(cerebral perfusion pressure，CPP)、CT/MR，AQP4、炎症因子、凝血酶（thrombin，TM）、内皮素（Endothelin，ET）的表达水平测定； 2) 通过中药“指文图谱”选用该方剂的地道中药，采用复合酶法新工艺制备口服“复方黄金香提取液”； 3) 评估口服 “复方黄金香提取液”后病人症状、体征、GCS、ICP、CPP、CT/MR，AQP4、炎症因子、TM、ET的表达水平情况； 4) 检测PKC、CaMKⅡ、NF-κB上游信号通路相关分子的表达（相关试剂盒）； 5) 用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测口服“复方黄金香提取液”对TBE病人AQP4表达的影响。
二、项目先进性、可行性
（一）项目的先进性（500-2000字） 目前，治疗TBE的主要原则是改善灌注、氧供、降低脑组织代谢水平，减少离子梯度和张力梯度的变化。尽管各种治疗手段对TBE有一定疗效，但效果仍不满意，其残废率、死亡率仍高达30%～50%。原因很多，其中较为公认的原因：（1）未能有效改善脑缺血缺氧、微循环障碍及由此导致的一系列病理生理改变；（2）未能有效控制神经细胞和微血管内皮细胞钙超载及氧自由基等神经递质的作用； （3）由于耐药和药物的个体差异，迄今未找到治疗TBE的特效方法和药物。 近年来我们在原祛瘀通腑汤的基础上，采用改良后的中药方剂(复方黄金香提取液)干预大鼠TBE后能明显减轻脑水肿，其AQP4的表达水平显著下调，其效果明显优于“祛瘀通腑汤”， 与目前国际上对AQP4在TBE发生机制中重要作用的最新认识相符。 其次，临床观察中发现TBE突出的表现为缺血缺氧（低氧）及炎症反应。这类病人表现出的缺血缺氧（低氧）及炎症反应，与中医辨证的血瘀气滞、气血两虚、痰湿扰心等理论相似。总结我们过去的治疗经验发现，原“祛瘀通腑汤”中没有补气化痰类药，故我们加用补益气血、引血归经、清热、利湿、化痰类药组成“复方黄金香”方剂，采用复合酶法制成“复方黄金香提取液”治疗，以达到既要祛瘀通腑又要益气解瘀、利湿化痰，如此双管齐下的方法治疗TBE。还可以充分利用提取药物的有效成份（去除了杂质）进行治疗，更有利于病人的康复。 该项目经数十年治疗TBE的实践，具有很强的实用价值。首次提出“益气化痰、祛瘀通腑”法治疗TBE的新立论，不囿于传统的脱水、利尿和单纯的祛（化）瘀通腑疗法。筛选有效中药方剂，创新组成新的方剂 “复方黄金香提取液”，配方严谨合理有效。复合酶法提取复方中药（去除杂质，保留有效成份）未见报道（制备过程见图1）。首次研究“复方黄金香提取液”对TBE AQP4表达的影响及上游信号通路（PKC、CaMKⅡ、NF-κB）的调控及时间/疗效的关系。
（二）项目的可行性（500-2000字） 1．科室优势 本单位研究脑水肿、颅高压30余年，经验丰富，技术力量雄厚，设备先进、齐备。目前已成为湖南省规模最大、急诊就诊人数最多，具有先进急救服务理念与现代化设施，集内、外、妇、儿、眼、耳鼻喉、口腔、神经内外科各种危急重症、创伤、中毒病人救治为一体，24小时应诊的大型综合性急救医学科。年接诊急诊病人10万余人次，急诊留观病人4万多人次，抢救各类危重病人7000余人次，同时为国家新药临床试验基地。近3年发表学术论文共40余篇，其中SCI论文2篇，CSCD论文20篇，承担省部级获课题9个，总经费47万元。主编著作3 部。先后有多人作为访问学者前往德国、瑞典、美国、日本等国学习。 2．医院优势 中南大学湘雅二医院是一所卫生部直管、国内学科最齐全、湖南省规模最大、技术力量最雄厚的大型三级甲等医院之一。医院作为湖南省内综合技术实力及师资科研力量最强医疗机构之一，现有在岗正式职工3171人，其中高级专业技术人员598人；占地面积220余亩（其中医疗用地140亩），医疗建筑面积22.26万平方米，编制床位3500张；设有26个教研室、40个临床科室、8个医技科室、72个病区以及7 个研究所、23个研究室（中心）；固定资产总价值15亿余元，其中仪器设备总价值近7亿元，拥有PET—CT、23EX高能直线加速器、国际最先进的数字减影心血管造影仪（DSA）、核磁共振仪等千万元以上设备7台（件）。 3．临床工作基础 申请者于1993年以来，开展了“祛瘀通腑汤”治疗TBE的临床实验研究，积累了丰富的经验。已熟练掌握建立TBE模型（TBI模型改良），已发表数篇相关论文。复合酶法提取天然植物药技术成熟，已产业化，复合酶法提取复方中药方剂已获成功（制备过程见图1）。 原料 粉碎 水浸泡 用复合酶（包括果胶酶、蛋白酶、纤维素酶等）酶解处理 热水浸泡 过滤 滤液 浓缩 （大孔树脂） 层析柱 分段淋洗 过滤 成品药物溶液（含活性成分） 备用 图1. 复合酶法制备“复方黄金香提取液”的步骤简介
预实验证实“复方黄金香提取液”（祛瘀通腑汤改良）治疗TBE已获显效，能显著下调AQP4的表达[中南药学，2009]（结果见图2-A、B、C、D，图3）。 Sham组 TBE组 图2-A 假手术（对照组） ×200 图2-B TBE 24小时组 ×200 ↑正常神经元, 空泡变性的神经元。 图2-C 祛瘀通腑汤24小时组 ×200 ↑发生水肿的神经元, 神经元周围的组织 间隙水肿，但程度较创伤组24小时组明显 好转。 图2-D复方黄金香提取液24小时组 ×200 与祛瘀通腑汤组相比，复方黄金香提取液组更能显著改善脑水肿。 ↑坏死神经元，神经元周围的组织间隙水肿、坏死明显呈筛网状改变。 祛瘀通腑汤组 复方黄金香提取液组 图2. “复方黄金香提取液”（祛瘀通腑汤改良）治疗TBE大鼠病理组织检查
一份自然科学基金问题 - 图文
