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纸层析法分离氨基酸
一、前言
纸层析法
纸层析法又称纸色谱法， 是目前广泛应用的一种分离技术。 本世 纪初俄国植物学家 M.Tswett 发现并使用这一技术证明了植物的叶子 中不仅有叶绿素还含有其它色素。 现在层析法已成为生物化学、 分子 生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。 它是一种以纸为载 体的色谱法。 固定相一般为纸纤维上吸附的水分， 流动相为不与水相 溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰 胺等。将试样点在纸条的一端， 然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展 开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分 离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定 斑点位置。根据组分移动距离 （Rf 值 ）与已知样比较，进行定性。用斑 点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量 （如光 度法、比色法等 ）。
纸层析法 （paper chromatography） 是生物化学上分离、鉴定氨 基酸混合物的常用技术， 可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定 量测定 ;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、 抗菌素等物质的一种分离分析工具。 纸层析法是用滤纸作为惰性支持 物的分配层析法， 其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相， 展层用的有 机溶
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溶剂是流动相。
在环境分析测试中， 有时用纸层析法分离试样组分， 它用于一些 精度不高的分析，如 3，4-苯并芘。但不如 GC、HPLC 应用普遍。
做叶绿体色素分离时用到 ,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体 与层析液 （石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析 液中的溶解度不同， 在滤纸上留下 4 条色素带。 由此观查出各种色素 的相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离， 叶绿体中色素主要包括 胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度 不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢 ;含量较多 者色素带也较宽。 最后在滤纸上留下 4 条色素带， 所以利用纸层析法 能清楚地将叶绿体中的色素分离。
氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，广泛用于食品、医药、添加剂 及化妆品行业。随着生物工程技术产业的发展逐渐成为 2l 世纪全球 的主要产业之一，氨基酸的需求量越来越大，品种变更越来越快，工 艺改革越来越新。目前全世界氨基酸每年的产量为 100 万吨，而需 求总量是 800 万吨。我国自 20 世纪 60 年代起，氨基酸的应用在食 品工业占 61,，在饮料工业占 30, ，医药、日用化工、农业、冶金、 环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。
氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用 : （ 1 ）在食品行业的应用 （2）在医药工业的应用
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（3）在饲料添加剂行业的应用 （4）在化妆品行业的应用 （ 5）在农业上的应用 （6）在其他行业的应用
氨基酸工业还有着广阔的发展前景 : （ 1）传统的氨基酸生产方法 （ 2）运用基因工程手段生产氨基酸 （ 3）大力发展药用中间体 ,具体为 :
① 氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
② 非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料 ③生产高附加值的非天然氨基酸
二、实验目的
1. 掌握分配层析的原理，学习氨基酸纸层析法的操作技术
点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量 ）。
（包括
2. 学习未知样品的氨基酸成分 （水解、层析及鉴定 ）分析的方
法。
三、实验原理
1. 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。 滤纸纤维上的羟基
具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相 流
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