分离以尿素为氮源的微生物
1．实验原理：利用尿素的细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。其反应式为(NH2)2C===O＋H2O――→2NH3＋CO2，生成的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由红黄色变成红色。
2．实验步骤
脲酶
3．预测本实验的结果：LB全营养固体培养基上的菌落多而杂；尿素固体培养基上的菌落少而纯；一定时间内，菌落周围出现红色区域。用浓度为10更容易形成单菌落的是10
－5
－4
和10
－5
土壤稀释液接种，
土壤稀释液。
[基础诊断]
(1)尿素培养基配制时各种成分均需要过滤灭菌(×)
(2)脲酶分解尿素为氨气，酚红指示剂遇氨气(碱性)变红色(√) (3)涂布分离后不能倒置培养皿，防止涂布的菌液流出(×)
(4)分离以尿素为唯一氮源的微生物时，尿素培养基中加入琼脂作为凝固剂(×) (5)制备土壤悬液时，在无菌条件下，将土样与无菌水混合摇匀后尽量吸取土样，以增加微生物的数量(×)
(6)涂布分离法分离细菌，一般采用移液器吸取0.1 mL样液加到含有相应培养基中(√) (7)涂布分离法能够计数菌落数，采用该方法统计出的细菌数通常偏少(√) (8)尿素培养基上的微生物数量比全营养培养基上微生物数量多(×)
1．培养基中观测指标的分析
(1)培养基中的酚红指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。
(2)与全营养培养基上的菌落数比较，尿素培养基上只有少数菌落，这一现象表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少部分。
2．微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用 对照组 未接种培养基 作用 有无杂菌污染的判断 现象 未接种的培养皿中无菌落生长 LB全营养培养基上的菌落数大于选择培养基上的数目 结论 未被杂菌污染 接种的LB全营养培养基 选择培养基筛选作用的确认 选择培养基具有筛选作用 3.样品稀释的原因和标准 (1)稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数。在适当的稀释度下，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数的关键。
(2)稀释标准：选用一定范围的样品稀释液进行培养，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板计数。
[题组冲关]
1．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下列实验结束后的做法错误的是( )
A．对接种环进行灼烧处理
B．带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 C．带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D．接种后双手必须用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭
解析：选C。金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接种后双手用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也可以杀灭细菌，防止污染环境；高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，因为此菌的耐高温能力很强，会污染环境。
2．(2020·浙江台州高三模拟)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答下列问题：
(1)该实验培养基不能含有____________。 A．尿素 C．葡萄糖
B．氯化钠 D．琼脂
(2)尿素溶液可用____________使之无菌。若要检查B过程灭菌是否彻底，可以采用的方法是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。 (3)图中步骤C为____________。相对于划线分离法，过程D涂布分离法的优点是____________。
(4)如果菌落周围出现____________色环带，说明该菌落能分泌脲酶。
答案：(1)D (2)G6玻璃砂漏斗过滤 将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间，观察有无菌落出现 (3)倒平板 单菌落更易分开 (4)红
1．下列关于微生物的培养和分离的叙述，错误的是( ) A．通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B．利用划线分离法可以统计样品中活菌的数目 C．划线分离法和涂布分离法常用于微生物的接种
D．微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同
解析：选B。消毒是指杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽孢的方法。统计样品中活菌的数目要用涂布分离法，划线分离法办不到。微生物接种最常见的方法是划线分离法和涂布分离法。不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中加入的物质也就不同。
2．下图是利用牛肉膏蛋白胨培养基培养和纯化X细菌的部分操作步骤。有关叙述正确的是( )
A．步骤①中，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上污染培养物
2021版浙江新高考选考生物一轮复习：第31讲 微生物的利用
