固相萃取净化及超高效液相色谱-串联质谱法测定橡胶制品
中的13种N-亚硝胺
陈 婷1，3，温裕云2，3，欧 延2，弓振斌1，3＊
【摘 要】摘要:建立了固相萃取（SPE）净化、超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS／MS）测定橡胶制品中13种N-亚硝胺的方法。样品于密闭萃取瓶中于60℃下用甲醇超声萃取30 min，C18固相萃取小柱对萃取液进行净化，经C18色谱柱分离，最后用电喷雾正离子（ESI＋）和多重反应监测模式（MRM）对13种N-亚硝胺进行定性、定量测定。实验中对样品前处理、色谱分离条件和质谱检测条件进行了优化。在优化的实验条件下，橡胶样品中添加N-亚硝基二甲胺（NDMA）与 N-亚硝基-二乙基胺（NDEA）为500μg／kg、其他组分均为50μg／kg时，各组分的相对标准偏差（RSD，n＝7）小于10%；在实际样品中的加标回收率为70.7%～117.0%；方法的检出限（LOD，以10倍标准偏差计）为0.5～500μg／kg。方法可应用于橡胶制品中13种N-亚硝胺的测定。 【期刊名称】色谱
【年(卷),期】2014(032)001 【总页数】6
【关键词】关键词:固相萃取；超高效液相色谱-电喷雾电离串联质谱；N-亚硝胺；橡胶制品
N-亚硝胺是含有-N-N＝O基团化合物的总称。N-亚硝胺可通过呼吸道、消化道或皮肤表面吸收进入人体。国际癌症研究总署（IARC）将N-亚硝基二甲胺（NDMA）列入极可能致癌的物质组［1，2］。橡胶制品中的N-亚硝胺主要来
自以仲胺（如吗啉、二异丙胺等）为基础的硫化促进剂和硫黄给予体，这些物质与空气或配合剂中的氮氧化物（NOX）反应生成稳定的N-亚硝胺［3］；大部分橡胶制品中检出的N-亚硝胺主要来自添加或回收使用含有N-亚硝胺的橡胶原料。为此，欧盟指令明确规定在弹性体、橡胶奶嘴、安抚奶嘴中N-亚硝胺的迁移量不得超过10 μg／kg［4］，而儿童玩具中不得检出N-亚硝胺化合物［5］；我国对橡胶、弹性体材料中的 N-亚硝胺也加以限制，规定其含量不得超过500μg／kg［6］。针对以上要求或含量限制，建立快速、准确测定橡胶制品中N-亚硝胺含量的方法是对橡胶制品化学安全性进行评估的基础，对环境安全和人类健康具有重要的现实意义。
N-亚硝胺的测定方法主要有分光光度法［7］、气相色谱法［8-12］、液相色谱-质谱法［13-16］等，主要应用于化妆品［9］、饮用水［11，12，14，17，18］、水产品［19］或啤酒［8］等样品基质；而液相色谱-串联质谱因灵敏度高、选择性好，适应于橡胶［15］等复杂样品中痕量 N-亚硝胺的准确测定。本工作选择欧盟严格限制或禁用的NDMA、N-亚硝基吗啉（NMOR）、N-亚硝基吡咯烷（NPYR）、N-亚硝基甲基乙基胺（NMEA）、N-亚硝基哌啶（NPIP）、N-亚硝基二异丙胺（NDIP）、N-亚硝基-N-甲基苯胺（NMPhA）、N-亚硝基二丙胺（NDPA）、N-亚硝基-N-乙基苯胺（NEPhA）、N-亚硝 基 二 丁 胺 （NDBA）、N-亚 硝 基-二 乙 基 胺（NDEA）、N-亚硝基二苯胺（NDPhA）和 N-硝基联苄基胺（NDBzA）等13种N-亚硝胺为研究对象，通过对样品前处理、色谱分离、质谱检测等实验条件的选择和优化，建立了橡胶制品中13种目标物的超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS／MS）测定方法。
1 实验部分
1.1 主要仪器和试剂
Agilent 1290超高效液相色谱仪，配置6460串联质谱仪（G4220A Bin Pump，G4226A Sampler，G1316C TCC，G6460 Triple Quad）、Eclipse Plus C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8μm）（Agilent Technologies，USA）；BHA-9050A浓缩仪（Caliper Life Sciences，USA）；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
甲醇、乙腈为LC-MS级（Merck公司）；甲酸、乙酸、甲酸铵和乙酸铵均为LC-MS级（Sigma公司）；聚四氟乙烯针式微孔过滤膜（直径13 mm，孔径0.22μm；天津津腾实验设备有限公司）；C18键合硅胶填料（40～60μm，北京振翔工贸有限公司）；屈臣氏纯净水（广州屈臣氏集团）。
待测目标物 NDMA、NMOR、NPYR、NMEA、NPIP、NDIP、NMPhA、NDPA、NEPhA、NDBA、NDEA、NDPhA和NDBzA均购自AccuStandard公司，纯度大于98.0%。使用时分别称取适量标准品，用甲醇配制质量浓度为100 mg／L混合标准储备液，于4℃下保存；使用前再稀释配制成合适浓度的混合工作液。
1.2 固相萃取小柱的制备
称取1.0 g硅胶或活性炭、中性氧化铝等填料，装入预先填入适量玻璃棉的6 mL塑料注射针筒中，轻敲击使填料填实，制成硅胶（或活性炭、中性氧化铝）固相萃取小柱，待用。 1.3 样品预处理方法
将待测样品粉碎或剪切至大约3 mm的颗粒，称取1.0 g于10 mL具塞萃取瓶
固相萃取净化及超高效液相色谱-串联质谱法测定橡胶制品中的13种N-亚硝胺
