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实验一 糖类的性质实验
（一） 糖类的颜色反应
一、 实验目的
1、了解糖类某些颜色反应的原理。
2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、 颜色反应 （一）α-萘酚反应
1、原理 糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材
试管及试管架，滴管 3、试剂
莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL 0.1％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作
取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。观察记录各管颜色。 （二） 间苯二酚反应 1、原理
在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材
试管及试管架，滴管 3、试剂
塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作
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取3试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5 mL。再向3支试管中各加入塞氏试剂5 mL，充分混合。将试管同时放入沸水浴中，。观察记录各管颜色。
(二)糖类的还原作用
一、实验目的
1、理解并掌握糖类的还原性质；
2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。
3、了解斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理。 二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。 三、器材
试管及试管架，水浴锅 电炉 四、试剂 1 斐林试剂
甲液 氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液。 乙液 硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液。 2 本尼迪克特试剂
3 1％葡萄糖溶液100 mL 4 1％果糖溶液100 mL 5、1％蔗糖溶液100 mL 五 实验操作 六 思考题
1、斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理是什么？ 2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。
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实验二 总糖的测定---蒽酮比色法
一、实验目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、实验原理
强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10-100ug围其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料 1 .仪器
(1) 分光光度计 (2) 电子顶载天平
(3) 三角瓶： 50m1 X 1 (4) 大试管： 9 支 (5) 试管架，试管夹 (6) 漏斗，漏斗架
(7) 容量瓶： 50 m1 X 2
(8) 刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 (9) 水浴锅 2 .试剂
(1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2) 浓硫酸
(3) 蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100ml浓 H2SO4中当日配制使用。 3 .材料
小麦分蘖节（或者其它材料）。 四、操作步骤
1 .葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 （ ml ） 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取
将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 1g, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，
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定容至刻度。吸取提取液2m1 ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定
吸取lml 已稀释的提取液于大试管中，加入4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。
查表所得糖含量(ug)×稀释倍数 五、结果处理 六、注意事项
1 该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 H 2 SO 4 要用高纯度的。
3 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题
1蒽酮比色测定糖的原理是什么？ 2 用水提取的糖类有哪些？
3 制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项？
4 分光光度计的原理是什么？使用时需要注意哪些？
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实验三 粗脂肪的提取和定量测定
一 实验目的
1. 学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。
2. 熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处理、定量转移、烘干、恒重等。 二 实验原理
本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。
用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。
三 仪器、试剂和材料 1 .仪器
索式提取器，分析天平，烧杯，烘箱，干燥器，恒温水浴，脱脂棉，脱脂滤纸，镊子
2 试剂和材料
石油醚 芝麻或者花生等油料种子。 四、实验步骤 1.样品的准备
将花生在80度烘箱烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管。注意勿使纸包样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中 2.抽提
2.1洗净提取瓶于105度烘干至恒重，记下其重量。装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。
2.2 加热提取：使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，用滤纸粗略判断脂肪是否提取完全。
2.3 蒸去石油醚，烘干至恒重。 3.称量计算
粗脂肪%=脂肪重÷样品重×100% 思考题
1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？ 2、做好本试验应注意哪些事项？
3、本实验装置磨口处为什么不能涂抹凡士林或真空脂？
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生物化学实验报告
