牛奶中残留抗生素免疫检测方法研究进展
李周敏1 方惠群1 许丹科2
【摘 要】 抗生素已经被广泛应用于人类及动物细菌感染的治疗与预防中，但由于它们有可能被添加至动物饲料中，而导致牲畜及牛奶中抗生素残留量超过最大残留允许量，因此抗生素使用的水平是否会造成对人类健康的危害成为人们持续关注的问题。为了测定抗生素残留的含量，人们正在研发准确、简单和低成本的新型检测方法。几类用于检测牛乳及乳制品中残留抗生素的方法已经建立，包括仪器分析方法、微生物检测法和免疫检测法等。主要综述基于抗原抗体特异性识别原理的免疫分析技术以及免疫传感器、蛋白芯片与表面等离子体共振（SPR）等几种新的免疫检测方法，阐述这些方法所具有的简便、成本低、高灵敏和特异性好等特点。 【期刊名称】生物技术通报 【年(卷),期】2012(000)011 【总页数】7
【关键词】 抗生素 残留检测 免疫分析 蛋白芯片 生物传感器 【文献来源】
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_biotechnology-
bulletin_thesis/0201254987148.html
抗生素作为兽药和饲料添加剂被广泛应用，可能会造成抗生素在动物源性食品中的残留。牛奶等乳制品中抗生素残留不仅会影响乳制品的品质，如严重影响发酵乳制品的生产，降低产量及破坏后期产品风味，给生产者造成经济损失，而且会对人体造成极大的伤害，如引起人体的过敏反应（皮疹、过敏性休克等），抑制肠道中正常的敏感菌群的生长，使致病菌、念珠菌大量增殖而导致全身或
局部感染，并且会导致人体对抗生素产生抗药性，给临床治疗带来很大的危害。目前，牛奶中抗生素的残留已引起消费者的高度重视，因此，加强抗生素的残留检测尤为重要［1，2］。
世界各国对牛奶的抗生素残留作了严格的规定。我国乳制品国标中有明文规定，注射过抗生素的奶牛5 d内所产的牛奶均不允许出售食用；美国规定A级巴氏奶原料奶中应没有抗生素残留，对原料奶的抗生素检测为强制性；欧盟亦对最大残留量（MRLs）作了详细的规定（表1）。为了达到日渐严格的残留限量检测的要求、保障牛奶的食用安全，各国在均努力发展各种快速、准确、灵敏度高的新检测方法。
目前，国内外用于检测乳及乳制品中残留抗生素的方法很多，按照检测原理和使用的仪器可分为：理化检测法，微生物检测法和免疫检测法等［3］。 近年来，检测技术迅速发展，已有大量准确、敏感性高的理化检测方法满足日趋严格的残留限量要求，如HPLC法、GC法和MS法，仪器联用法如LC-MS、GC-MS、CZE-MS和LC-NMR等，LC-MS则更有效。仪器联用技术和多残留分析技术体现了仪器分析方面的另一主要趋势，但所有的这些方法均需要有精密的大型仪器。另外，对于如氨基糖苷类抗生素如庆大霉素缺少发色基团，用HPLC进行测定时常要对其衍生化处理。测定牛奶中其他抗生素残留量时，同样存在样品前处理繁琐，测定方法相当复杂，设备要求高，技术难度大，需受过专门训练的人员才能操作，检测通量小，只能适合于中心实验室或作为确证。在我国目前动物养殖分散经营的情况下，很难统一管理，因此导致动物源性食品的质量很难一致，单纯采用大型仪器检测监控产品质量，很不现实，而且仪器检测费用高，很难普及使用。在乳品生产第一线，高敏感性的快速检测方法
和试剂盒则成为保障无抗奶的最重要的手段。
微生物检测法作为筛选检测法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，主要包括杯碟法、纸片法、琼脂扩散法和氯化三苯基三氮唑法（TTC）。其中，纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。采用传统的微生物检测方法的优点是费用低，一般实验室都能操作。但也存在以下缺点：（1）时间长；（2）显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法作出准确判断；（3）操作复杂。
免疫分析法（immunoassays，IAs）主要分为放射免疫分析（RIA）、酶联免疫分析（ELISA）、荧光免疫分析（FIA）、化学发光法及固相免疫传感器（solid phase immune-sensor，SPI）等。免疫分析法最突出的优点是操作简单、速度快、分析成本低。目前大部分抗生素已经建立了免疫测定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、四环素及莫能菌素等。
现主要介绍基于抗原抗体特异性识别原理的放射免疫法、酶联免疫吸附法、酶联免疫受体法、荧光免疫法以及胶体金免疫层析技术等几种常见检测技术及其应用概况，并介绍免疫传感器、蛋白芯片、表面等离子体共振（SPR）等几种新的免疫检测方法的研究进展。
1 免疫检测法
免疫分析是利用抗原与抗体的特异性结合反应为基础的分析方法，它以对抗生素具有特异性识别作用的抗体为核心试剂，具有高选择性、高灵敏度等特点。根据免疫学理论，小分子化合物（分子量低于5 kD），不具有免疫原性，不能直接刺激动物产生抗体。若将结构上具有一定复杂性的有机小分子（半抗原）
牛奶中残留抗生素免疫检测方法研究进展
