一网打尽| 外泌体miRNA研究策略、经典案例、数据库
2013年，美国、德国3位科学家凭借他们所发现的细胞囊泡运输的调节机制，荣获2013年诺贝尔生理学或医学奖。细胞分泌的外泌体通过携带生物分子（蛋白质、miRNAs、DNA 和非编码 RNAs）在细胞囊泡运输中发挥不可或缺的作用。外泌体在肿瘤等疾病的基础研究、转化应用和诊断治疗中呈现巨大潜力，许多外泌体miRNA作为肿瘤标志物陆续被发现，研究热度、paper数量皆是蹭蹭上涨。在国自然项目中，外泌体的中标项目及资助金额也是持续飙升，可谓是当之无愧的“国自然宠儿”。
这时候您可能会说“我的研究用不上外泌体”，又或者说“我的课题与外泌体无关”。然而事实并非如此，外泌体并不是一个终极分子或终极蛋白，它的真实身份是一个单位，一种细胞与细胞的沟通形式。因此，几乎所有生物医药研究领域，从外泌体的角度进行挖掘将是一个全新的视野！本文将以外泌体miRNA研究为例，包括其研究策略、经典案例、多种数据库向科研君们一一阐述，助您获得新思路。
研究策略
策略一：生物标志物
外泌体存在于各种体液（如血液和尿液）中，外泌体中的生物标志物具有检测方便、伤害小的特点。外泌体miRNA作为生物标志的研究有很多，课题设计思路主要如下 寻找生物表型、选择样本
收集外泌体，提取总RNA或 miRNA 高通量测序筛选具有差异表达的 miRNA 用qPCR等方法验证筛选
结合临床鉴定结果（用这些 miRNA判断未知样本的状态，再与临床或生理鉴定结果比对，确定与临床结果相符度高的 miRNA）
以上是外泌体miRNA的简单研究思路，即发现不同样本中有差异的miRNA，再用此 miRNA去判断未知样本的状态，验证其作为标志物的成功率。这种课题设计比较简单，属于短平快类的课题。Paper影响因子可能不高，但如果样本量充足、逻辑严密、再带些下游功能实验的话，也可发不错的期刊。
注意点：研究的miRNA是在外泌体中，而非其他囊泡。
案例1
外泌体 miRNAs 参与肺癌细胞的增殖、迁移、血管生成和上皮-间质转化，因此促进肿瘤生长、转移和侵袭。
The roles of exosomal miRNAs and lncRNAs in lung diseases.Signal Transduction and Targeted Therapy.
案例2
外泌体的生物发生、组成和在结直肠癌中 TME 修饰的主要作用。外泌体中 miRNA 的差异表达也可以作为结直肠癌诊断和监测的生物标志物。
Exosomal miRNA: Small Molecules, Big Impact inColorectal Cancer.J Oncol.
策略二：外泌体中 miRNA功能探究
这类的课题设计更深入的探讨外泌体中 miRNA的功能，而并非仅限于标志物。课题设计一般包括:
寻找生物表型、选择样本
收集外泌体，提取总RNA或 miRNA） 高通量测序筛选具有差异表达的 miRNA 用qPCR等方法验证筛选
确定接收（确定这些 miRNA可以被靶细胞接收）
靶细胞验证（在靶细胞中，完成 miRNA的下游靶点相关实验，证明这种对 miRNA的调控具有何种生物学作用）
这个课题设计虽然只有后两步与生物标志物不同，但是后两步属于功能实验部分，是文章的重头戏。作者需要用大量实验数据证明差异 miRNA被靶细胞接收的机制，是通过哪些靶点？何种方式？哪个通路引发了下游怎样的反应导致了两种表型的不同？如果作者再适当地加入体内实验（动物实验），文章会更有说服力，发表的影响因子也会更高。 注意点：
1. 研究的miRNA是在外泌体中，而非其他囊泡；
2. 在功能与靶点研究时，硏究对象是靶细胞而不是原位细胞。
案例
一网打尽 - 外泌体miRNA研究策略、经典案例、数据库-2019.12.17
