山东康源堂中药饮片有限公司 标题：红花检验标准操作规程 制定人： 审核人： 日期： 日期： 分发部门：质量部、质检中心 编号：SOP-JY-21081-02 批准人： 日期： 页数：1/5 颁发部门： GMP办公室 生效日期： 目的：建立红花检验标准操作规程，使检验操作规范化，保证检验结果准确可靠。 范围：适用于红花的检验操作。 责任：质检中心负责实施。 内容： 1 检验依据
《中华人民共和国药典》2015年版一部。 2 取样
2.1 按“药材取样法”的原则取样。 2.2 取样标记清楚、明白，以供检验。 3 检测 3.1 性状 3.1.1仪器：直尺
3.1.2方法：本品为不带子房的管状花，长1～2cm。表面红黄色或红色。花冠筒细长，先端5裂，裂片呈狭条形，长5～8cm；雄蕊5，花药聚合成筒状，黄白色；柱头长圆柱形，顶端微分叉。质柔软。气微香，味微苦。 3.2 鉴别 3.2.1 显微鉴别
3.2.1.1仪器与试剂：显微镜等。
3.2.1.2方法：本品粉末橙黄色。花冠、花丝、柱头碎片多见，有长管状分泌细胞常位于导管旁，直径约至66μm，含黄棕色至红棕色分泌物。花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状。柱头和花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60μm，具3个萌发
山东康源堂中药饮片有限公司 标题：红花检验标准操作规程 编号：SOP-JY-21081-02 页数：2/5 孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径2～6μm。 3.2.2 理化鉴别
3.2.2.1方法：取本品粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7：2：3：0.4)为展开剂，展开取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 3.3检查
3.3.1水分不得过13.0％（通则0502）
取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm；疏松供试品不超过10mm ；精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。 计算公式：
含水量% =
式中：
W --------------- 称量瓶恒重g。
m ----------------供试品称重g。
(W?m)?M2(M3)×100%
m M1------------------------（称量瓶+供试品）一次干燥后称重g。 M2-------------------------（称量瓶+供试品）二次干燥后称重g。 M3-------------------------（称量瓶+供试品）三次干燥后称重g。
3.3.2 总灰分 不得过15.0％（通则2302）。
测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2～3g（如须
山东康源堂中药饮片有限公司 标题：红花检验标准操作规程 编号：SOP-JY-21081-02 页数：3/5 测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（％）。
如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10％硝酸铁溶液2ml，使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化。 计算公式：
总灰分% =
式中：
W ----------- 坩埚恒重(g)。 m ----------- 供试品恒重(g)
M1----------- (坩埚+残渣）一次称重(g) M2----------- (坩埚+残渣）一次称重(g) M3----------- (坩埚+残渣）一次称重(g) 3.3.3酸不溶性灰分 不得过5.0％（通则2302）。
取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（％）。
3.3.4吸光度红色素 取本品，置硅胶干燥器中干燥24小时，研成细粉，取约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80％丙酮溶液50ml，连接冷凝器，置50℃水浴上温浸90分钟，放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100ml量瓶中，用80％丙酮溶液25ml分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80％丙酮溶液至刻度。摇匀，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在518nm的波长处测定吸光度，不得低于0.20。
M2(M3)?W×100%m
山东康源堂中药饮片有限公司 标题：红花检验标准操作规程 编号：SOP-JY-21081-02 页数：4/5 3.3.5杂质 不得过2％（通则2301）。 药材中混存的杂质系指下列各类物质：
3.3.1.1.来源与规定相同，但其性状或部位与规定不符： 3.3.1.2.来源与规定不同的有机质；
3.3.1.3.无机杂质，如砂石、泥块、尘土等。
检查方法 1.取规定量的供试品，摊开，用肉眼或放大镜（5～10倍）观察，将杂质拣出；如其中有可以筛分的杂质，则通过适当的筛，将杂质分出。
2．将各类杂质分别称重，计算其在供试品中的含量（%）。 【注意】
1.药材中混存的杂质如与正品相似，难以从外观鉴别时，可称取适量，进行显微、化学或物理鉴别试验，证明其为杂质后，计入杂质重量中。
2.杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按药材和饮片取样法称取。 3..4浸出物照水溶性浸出物测定法（通则2201）项下的冷浸法测定，不得少于30.0％。
测定用的供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。
取供试品约4g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（％）。
3.5含量测定 羟基红花黄色素A 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26：2：72)为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％
山东康源堂中药饮片有限公司 标题：红花检验标准操作规程 编号：SOP-JY-21081-02 页数：5/5 甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A(C27H32O16)不得少于1.0％。 山柰素 照高效液相色谱法（通则0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(52：48)为流动相；检测波长为367nm。理论板数按山柰素峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟。放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液(15→37)5ml，摇匀，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含山柰素(C15H10O6)不得少于0.050％。 4 操作要点
4.1 检验过程中一定要规范操作，以保证结果的准确性。 4.2 取样及检验原始记录必须及时、清楚、准确。
4.3 结束后进行实验室、仪器的清洁工作，关闭电源，关好门窗，方可离开。
21081红花检验标准操作规程
