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一文教你读懂流式散点图和等高线图
光信号是流式细胞仪的灵魂。流式细胞仪分析细胞的各种参数都是通过光信号来实现的。光信号包括了散射光信号和荧光信号。散射光信号可以用来反映细胞的大小和颗粒度等物理信息，包括前向角散射（forward scatter，FSC）和侧向角散射（side scatter, SSC），一般的流式细胞仪都具有这两个通道。而荧光信号可以用来反映反映细胞的抗原表达等化学特性。荧光通道的多少则是根据流式细胞仪的不同来确定的。这些特征都通过流式图来进行展示。 了解了流式细胞术的原理及荧光素的选择，要想读懂流式细胞术测出来的各种信息，我们必须知道如何读懂流式图。即使你不需要自己做流式，读懂流式图也是阅读文献不可或缺的技能。 流式图的种类非常多，最常用的是流式直方图和流式散点图，还有流式等高线图等。流式直方图只能显示一个通道的信息，而流式散点图和等高线图等则能同时显示两个通道的信息。 FSC和SSC是流式中两个非常基本的参数，FSC的值能代表细胞的大小，细胞的体积越大，其FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度，细胞不规则，细胞内细胞器和颗粒度越大，则SSC越大。所以可以利用FSC和SSC的特性对一些细胞进行区分，如人外周血的细胞，通过FSC和SSC就可以区分为三群（图1，图片来源于Google），该图属于流式细胞术中的散点图，即每一个点都代表了一个细胞。根据细胞大小和颗粒度的特征，可以把细胞分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三群。在该图中，FSC越往右，其信号越强，说明细胞越大，如单核细胞和粒细胞就比淋巴细胞体积大。SSC越往上，说明细胞颗粒度越强，单核细胞和粒细胞的颗粒度也比淋巴细胞强。 门 是流式中的一个重要概念，指的就是根据你的研究需要人为划定的一个区域。如图1种的方框。FSC和SSC也是流式分析中的第一道门，这两个通道反应的是细胞的物理特性，通常我们会根据细胞在这个门中的大体位置圈门再进行后续的分析。 流式的散点图在表示荧光信号的时候也具有非常重要的作用。如调节性T细胞的两个标志CD4和CD25（图2，图片来源于Google） X轴是CD4，越
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往右说明荧光越强。从图中可以看到X轴细胞分两群，一群是CD4+的细胞，一群是CD4-的细胞。Y轴是CD25，越往上说明荧光越强，从图中可以看到Y轴细胞也分CD25阳性和阴性两群。如果给图中的细胞往中间画个十字，就会出现四个象限，左上是CD4-CD25+，左下是CD4-CD25-，右上是CD4+CD25-，右下是CD4+CD25-。其中图A属于右上，即双阳性细胞。右图则是流式的直方图，红色的线对应的是左边的A门，蓝色的线对应的是左边的B门，越往右荧光越强。从右图可以看到A门中的细胞folate receptor 4这个抗原的表达比B门中的要强。右图中的纵坐标，是一堆的数字，它表示的是细胞的个数，比如横坐标上的某个荧光强度的点对应着多少个细胞。散点图和直方图的灵活组合可以展示很多信息。 流式的等高线图和散点图相似，都能代表两个通道的信息。等高线图和地理的等高线图原理相似，由相邻的点组合成闭合的环线。同一个环线上细胞的密度相同。地理上等高线越密集说明这个地方海拔变化越快。流式的等高线图如等高线越密集，说明这个地方的细胞数目密度变化越快。流式的等高线图比流式的散点图更能直观地体现细胞的分群。 上图为外周血的FSC和SSC图（图3，图片来源于网络），和图1一致，展示的都是外周血的细胞分群。比淋巴细胞FSC更小的那一群为细胞碎片。最左边是黑白图，中间是伪彩图，右边是等高线图。从图中可看出来，黑白图较为简洁，伪彩图也能在一定程度上反映细胞的密集程度，在伪彩图中颜色越鲜艳的地方细胞密度最大，图中的红色部分为该图中细胞密度最大的地方。等高线图最为直观，等高线越密集细胞密度越大。 tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！
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【医学要点】 一文教你读懂流式散点图和等高线图
