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高效液相色谱仪试卷(满分100分)
一、填空题（共52分，每空2分）
1、高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。
2、拖尾因子（T）用于评价色谱峰的对称性，除另有规定外，T
应在0.95-1.05之
间。 3、梯度洗脱装置分为两类：一类是外梯度装置（又称低压梯度）流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。（安捷伦液相），另一类是内梯度装置（高压梯度）。将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度（岛津液相）。 4、如色谱柱需长期保存，反相柱可以贮存于甲醇或乙腈中，正相柱可以贮存于经脱水处理后的正己烷中。保存时要旋紧柱堵头防止有机溶剂挥发导致色谱柱填料干裂、脱落。 5、气泡（空气）会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 6、高效液相色谱进样针：应选用液相专用的平头针。流动相pH值应控制在2-8之间。 7、将吸滤头分别放入脱气后的流动相中，旋转排液阀，排液5min；排液结束后应先更改低流速再旋紧排液阀，避免压力过大冲坏色谱柱。 8、以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60°C。 9、亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。
10、高效液相色谱法常用的检测器类型有紫外检测器、示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器、光电二极管阵列检测器等。（任意写4种）
二、名词解析（共16分，每空4分）
1、基线：是在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。
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2、保留时间：是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔，即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔。
3、色谱流出曲线：是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线，又称为色谱图
4、梯度洗脱：就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。 三、选择题（共16分，每空2分） 1、当流动相使用含有缓冲盐时，关机之前应对流路如何进行的清洗(B) A、不需要清洗，直接关机B、先用10%甲醇水冲60min，再用100%甲醇冲洗30min以上，最后进行关机C、先用100%甲醇冲洗60min以上，再用10%甲醇水冲30min后关机D、使用90%甲醇冲洗60min后关机 2、在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（D） A、提高柱温B、降低板高C、降低流动相流速D、减小填料粒度 3、在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（B） A、贮液器B、输液泵C、检测器D、温控装置 4、在液相色谱中,某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（C） A、组分与流动相B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相D、组分与组分 5、下列用于高效液相色谱的检测器，（D）检测器不能使用梯度洗脱。 A、紫外检测器B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器 6、液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？（B） A、0.5μmB、0.45μmC、0.6μmD、0.55μm 7、在液相色谱中，不会显着影响分离效果的是（B） A、改变固定相种类B、改变流动相流速 C、改变流动相配比D、改变流动相种类
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8、在高效液相色谱流程中，试样混合物在（C）中被分离。 A、检测器B、记录器C、色谱柱D、进样器
四、简答题（共16分，每空8分）
1、反相色谱柱的冲洗方法。
对于反相色谱柱，如使用缓冲液或含盐溶液作为流动性，在试验结束后，应用10倍柱体积（如150mm柱长，约15ml）的低浓度甲醇/乙腈-水溶液（10%-20%）冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出，再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（50%）冲洗，最后用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（80%-100%）冲洗，使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来。 如流动相中没有盐溶液，只是甲醇/乙腈-水溶液（小于80%），可直接用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液（80%-100%）冲洗。 2、为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？ 若流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作，这在梯度洗脱时尤其突出。
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高效液相色谱法考试答案
