****有限公司
文件名称 文件编码 制定人 ZL-SOP-031-01 日 期 日 期 日 期 日 期 份 微生物限度检查法 标准操作规程 审核人 审核人 批准人 颁发部门 生效日期 质量管理科 分发数量 分发部门：质量管理科、中心化验室
1.目的：
建立微生物限度检查法标准操作规程，规范微生物限度检查法检验操作，保证检验的质量。
2.范围：
适于本公司原辅料、成品的微生物限度的检查操作。
3.责任：
质量管理科、中心化验室、检验员。
4.检验依据：
《中国药典》2015年版四部非无菌产品微生物限度检查法操作方法。
5.内容:
需氧菌、霉菌和酵母菌计数及大肠埃希菌检测 5.1 简述 ?
需氧菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污
染程度的方法。也是用于评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者的卫生状况的重要手段和依据。
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需氧菌、霉菌和酵母菌计数均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法
之一，也是目前国际上许多国家常用的一种方法。以在琼脂平板上的需氧菌、霉菌和酵母菌形成一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在该规定条件下所
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****有限公司 文件名称 微生物限度检查法标准操作规程 文件编码 ZL-SOP-031-01 生长的需氧菌、霉菌和酵母菌的菌落数。不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
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一个需氧菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而
成。因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu），不应理解为需氧菌、霉菌、酵母菌的个数。
5.2 设备、仪器 ? ? ?
设备 洁净实验室
微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化
空气系统。
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结构和要求 洁净实验室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。操
作间与缓冲间之间应有样品传递舱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。洁净实验室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 洁净实验室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300LX。
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温度、湿度洁净实验室内的温度应控制在18～26℃，相对湿度最好在
40％～60％。
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操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不应低于 C 级，局
部洁净度为 A 级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于10Pa，操作间与缓冲间也应保持相对正压。操作台上备有药物天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
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缓冲间 缓冲间内应有洗手盆和无菌衣、帽、口罩、鞋套等。
洁净级别及检查方法 通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参
照《医药工业洁净室》（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准）进行洁净度验证。 不同洁净级别的微粒、浮游菌和沉降菌标准见下表1。表1
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****有限公司 文件名称 微生物限度检查法标准操作规程 文件编码 ZL-SOP-031-01 表2：
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沉降菌数测定（Ⅱ法）
洁净实验室操作台消毒擦拭处理后，先启动层流净化装置30min，将备妥
的营养胰酪大豆胨平板3 个（经 30～35℃预培养48h，证明无菌落生长）。以无菌方式（或经传递箱）移人操作间，置净化台左、中、右各1 个，开盖，暴露30min 后将盖盖上。在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。3 个平板生长的平均菌落数不超过1 个。
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操作间和净化工作台要定期检测其洁净度，分别应达到C 级和A 级。如
菌落数或微粒数超标，应清洗过滤系统中的过滤设施，必要时予以更换。
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在每次操作前、后用0.25％新洁尔灭溶液或5℅来苏尔（甲酚皂）或其他
适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，然后启动层流净化装置。
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阳性菌实验室 涉及实验室监控菌株的分离鉴定、样品阳性菌株的分离分
析、方法验证试验中的阳性菌操作等实验活动，应在专门的阳性菌实验室进行。除另有规定外，阳性菌实验室应符合国家Ⅱ级生物安全标准，阳性菌实验室应配备生物安全柜。阳性菌操作不得在供试品检验用洁净实验室内进行。
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微生物限度检查法标准操作规程
