PBS缓冲液的配制
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。以下是总结: 母液的配制:
0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制: 先配 0.2M PB (pH=7.4,100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4, 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可,如:
0.1M PB(PH=7.4) :取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至0.9%(g/100ml)即可。
另:其它各种另 PH 值的 0.2M PB(100ml)配方 :
pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 87.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19 81 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7
0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
称取8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
PBS是磷酸缓冲液的简称,不仅伪狂犬病毒要用它稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释,原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。 PBS也不是万能的,有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持最佳的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。
文献查得:磷酸缓冲液(PBS):NaCl 8.0g,KH2PO4 0.2g,
Na2HPO4 2.9g,KCl 0.2g,重蒸水1000mL,调pH至7.4。