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α2-抗纤溶酶检测介绍

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α2-抗纤溶酶检测介绍

用途

测定活化α2-抗纤溶酶的生物学含量,辅助诊断遗传性或获得性缺乏,和纤溶治疗效果。

概要和说明

α2-抗纤溶酶是最重要的纤溶活化酶纤溶酶的抑制剂,能迅速地形成一种不可逆、无活性的复合物。α2-抗纤溶酶活性降低可见于弥散性血管内凝血(DIC)并发纤溶亢进,或对含大量纤溶酶原激活物的器官施行手术时。而且,α2-抗纤溶酶缺乏也可能提示了合成障碍性疾病(如严重肝脏细胞受损)。α2-抗纤溶酶的检测也可用以辅助评价纤溶治疗中出现的疑难问题。

试验原理

样本中的α2-抗纤溶酶使纤溶酶失活。采用动力学方法测定残留纤溶酶的含量,即测定405nm水平的吸光度升高,反应公式如下:

α2-抗纤溶酶样本+纤溶酶过量→[α2-抗纤溶酶-纤溶酶]+纤溶酶(剩余)

?→HD-Nva-CHA-lys-OH + p-氮苯胺 HD-Nva-CHA-lys-pNA????纤溶酶(剩余)

样本要求

为了获得血浆,请小心混合1份枸橼酸钠(0.11mol/l)和9份静脉全血,避免产生泡沫。立即离心,不小于1500×g,至少10分钟。 标本的稳定性:

≤-20℃ 1个月 +2~+8℃ 2天 +15~+25℃ 6小时

保存于≤-20℃的冻融血浆需在37℃10分钟内解融,并在2小时内完成检测。患者血浆无需稀释。

试验方法

手工法:

比色杯 1cm厚度 波长 405 nm 实验温度 37℃

预温纤溶酶液、纤溶酶底物和塑料比色杯或试管至设定的温度下。

动力学方法的加样步骤 等渗盐水 血浆样本 纤溶酶 37℃混合并孵育1分钟 纤溶酶量 20μl - 1000μl - 20μl 1000μl 样本 纤溶酶底物 100μl 100μl 混合并测定△A405nm/min 分光光度计/秒表:30秒内读取吸光度值,同时开启秒表计时。分别于60秒、120秒后再次读取吸光度值,分别计算其△A/min值,然后计算此两个△A的平均值。

动力学方法评价

每次分析都需要至少作1个纤溶酶值(△A/minPEV)和1个参考值。采用有α2-抗纤溶酶靶值的参考血浆(如标准人血浆),同标本一样的方法测定。用下列公式计算实验室-内部因子FL: FL=

靶值(正常%)参考血浆

?A/minPEV???/min参考血浆标本中α2-抗纤溶酶用正常%表示,按照下列公式计算:

α2-抗纤溶酶样本(正常%)=FL×(△A/minPEV-△A/min样本) 注释

1. 将试验混合物的量加倍或减半不影响计算值或实验室-内部计算因子。

2. 如果样本的α2-抗纤溶酶比标准值小20%,建议试验中使用40μl样本。结果除以2。 3. 任意一次仪器的更改和新批号Berichromα2-抗纤溶酶必须重新测定实验室-内部因子

FL或参考曲线。

内部质量对照

每次校准和每天每8小时应运行2种质控物(1份为正常范围,另一份为病理范围)。质控物必须和标本一样处理。每个实验室应建立自身质控范围,即采用厂商提供的质控物的靶值和范围的均值,或者实验室建立的均值和可信范围。如果质控测定值超出可信范围,应核查试剂、实验室-内部因子FL,和/或参考曲线和凝血分析仪。

操作的局限性

诸如抑肽酶之类的纤溶酶抑制物可能会引起结果的升高。 由于复溶的纤溶酶会使粘度增高(因含甘油),建议纤溶酶液的移液时不能太快。 如果病人标本结果超过正常120%,用等渗盐水稀释标本并检测。结果乘以稀释因子以补偿稀释。若病人标本结果大于纤溶酶水平,提示病人α2-抗纤溶酶消耗殆尽。 检测结果须结合患者病史、临床表现及其他症状作出合理解释。

参考范围

80-120%

各实验室间的参考范围会因检测人群的不同以及所用的技术、方法、仪器和试剂批号的不同而不同。因此,每个实验室必须建立自身的参考范围或者当上述的一种或多种因素变化时进行修改。

测定范围

线性测量范围为正常值的0-150%。

α2-抗纤溶酶检测介绍

α2-抗纤溶酶检测介绍用途测定活化α2-抗纤溶酶的生物学含量,辅助诊断遗传性或获得性缺乏,和纤溶治疗效果。概要和说明α2-抗纤溶酶是最重要的纤溶活化酶纤溶酶的抑制剂,能迅速地形成一种不可逆、无活性的复合物。α2-抗纤溶酶活性降低可见于弥散性血管内凝血(DIC)并发纤溶亢进,或对含大量纤溶酶原激活
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