4． 花粉的二型性：在花药/花粉培养时，由于对培养条件的反应不同，花粉在形态上形成两种类型，一类是具胚性的，在烟草和大麦中，花粉小，染色浅，为胚性的；另一类为花粉大，染色深，朝成熟花粉方向发展。这种现象即花粉的二型性。
6． Ti质粒：Ti质粒是根癌农杆菌染色体外的遗传物质，为双股共价闭合的环状DNA分子。 8． 分子标记：指在分子水平上可标识的遗传多态性。主要也指DNA(或核苷酸序列)的多态性。 9． 植物细胞工程: 指以细胞为基本单位,在体外条件下进行培养、繁殖，或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿生产某种物质的过程。
10． 脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程
11． 体细胞胚胎发生：指从体细胞进行的类胚结构的生产。 12． 双单倍体：由单倍体加倍形成的纯合系。
13． 体细胞杂交：指不同种类的原生质体不经过有性阶段，在一定条件下融合创造杂种的过程。 14． T-DNA: T-DNA是农杆菌侵染植物细胞时，从Ti质粒上导入植物细胞的一段DNA。 16． 遗传标记：指可以稳定遗传的、易于识别的特殊的遗传多态性形式。 21． 原生质体：指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞。
22． 植板率：即形成愈伤组织的原生质体数量占所培养原生质体总数的百分比。 23． 对称杂种: 指杂种中具有融合双亲全部的核遗传物质
28． CPW13M：分离原生质体使用的含有13%甘露醇的CPW盐溶液 29． 对称融合: 是亲本原生质体在融合前未进行任何处理的一种融合方式。
31. QTL：数量性状座位或者数量性状基因座，它指的是控制数量性状的基因在基因组中的位置 32. 主效基因：贡献率较大，显著影响个体表型的基因
33. 遗传图谱：某一物种的染色体图谱，显示所知的基因和/或遗传标记的相对位置，而不是在每条染色体上特殊的物理位置。
34. DNA限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。 35.同尾酶：一类识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能酶切产生相同黏性末端的限制性内切酶。
二、填空
1．物理灭菌包括: 高温高压灭菌 ; 干热灭菌 ; 射线照射灭菌 和 过滤灭菌 。 2．任意写出三种常用的培养基： MS, B5, KM8P, N6等
3．胚培养的重要用途是克服 种间杂交的不亲和性 ,获得种间或属间杂种。
4．外植体脱分化形成愈伤组织一般经历3个时期，分别是： 启动期 ；分裂期 和 形成期 。 5．胚状体具有两个特点： 二极性 和 与母体植物或外植体的维管束系统无直接连系 。
6．逆境处理对某些植物的小孢子胚胎发生具有诱导作用,任意写出4种常用的逆境处理方式: 饥饿处理，高温处理，低温处理，γ射线，秋水仙素，重金属胁迫等
7．分离原生质体时果胶酶的作用是 降解胞间联丝 。
8．最常用的诱导细胞融合的方式是 PEG 和 电诱导 融合法。 9．目前聚合酶链式反应常用到的DNA聚合酶是 Taq 酶 。
10．利用分子标记辅助选择的重要条件是目标基因与分子标记存在 紧密连锁（或共分离） 关系。 11．种植转基因作物面积最大的4个国家分别是 美国 ； 阿根廷 ； 加拿大 和 中国 。 2．培养基的成分可以分为三大类，分别是： 无机营养物 ； 有机营养物 和 植物生长调节物质 。
3.培养条件下花粉的分裂增殖方式有4种类型，分别是： 营养细胞发育途径 ；
生殖细胞发育途径 ； 营养细胞与生殖细胞并进途径 和 花粉均等分裂途径 。 4．分离原生质体时纤维素酶的作用是 降解细胞壁的纤维素 。
5．幼胚培养可以挽救种间杂种胚,但当胚体很小时,往往采用 胚珠 培养获得杂种胚。
6．常用的原生质体培养方法有： 液体浅层培养法 ； 固体平板培养法 和 液固双层培养法 。 7．Ti质粒的T-DNA致瘤基因主要包括两类基因，分别是 细胞分裂素合成 和 生长素合成 基因。 8．目前种植面积最大的4种转基因作物是 大豆 ； 棉花 ； 油菜 和 玉米 。 9．在遗传转化中，目前广泛使用的选择标记是 NPTII 基因。 10．聚合酶链式反应（PCR）一般分变性、 复性 和 延伸 。 11．随机扩增多态性（RAPD）应用的随机引物长度一般为 10 bp 。 1．物理灭菌包括: 高温高压灭菌 ; 干热灭菌 ; 射线照射灭菌 和 过滤灭菌 。
2．任意写出三种不能高压灭菌的物质： 多糖、秋水仙素、玉米素、赤霉素、抗生素、酶、植物提取物、VB1、VB12、VC等
3．过滤灭菌主要是用来灭菌 不能高温高压灭菌 的物质。
5．植物细胞在离体条件下发育成植株，主要是通过两种途径： 器官发生途径 和 体细胞胚胎发生途径 。
6．单倍体可分为两类: 一倍单倍体 和 多倍单倍体 。 7． 花药培养 和 花粉培养 是诱导单倍体的主要途径。 8．分离原生质体的主要方法是 酶解 法。
9．测定原生质体活力常用的一种试剂是 FDA ，其母液是用 丙酮 配制的。 10．任意写出两种常用的鉴定体细胞杂种的方法 形态标记 和 分子标记 。
12．检测外源基因是否整合进植物基因组常用的两种方法是 PCR 技术和 Southern blotting 技术。 1．化学灭菌包括： 熏蒸灭菌 和 消毒液灭菌 。
2．任意写出5个植物离体遗传操作常用的设备： 高压灭菌锅 ； 超净工作台 ； 光照培养箱 ； 摇床 和 显微镜 。
3．从外植体形成愈伤组织大致经历三个时期: 启动期 ; 分裂期 和 形成期 。 4．胚状体有两个特点，即： 二极性 ； 与母体组织无维管束联结 。
5．培养条件下花粉的分裂增殖方式有四种类型，分别是： 营养细胞发育途径 ；生殖细胞发育途径；营养细胞和生殖细胞并进发育途径 和 花粉均等分裂途径 。
6．分离原生质体使用的主要酶种类包括： 纤维素酶 和 果胶酶 。
7． 原生质体融合一般包括三个技术环节，它们是 诱导原生质体融合 ； 选择融合体或杂种细胞 和 杂种植株的再生与鉴定 。
9. 遗传转化主要分为两大类，一类是 载体介导 的遗传转化，另一类是 非载体介导 的遗传转化。 三、判断题 （下列叙述对的在括号中打√，不对的打× 2．CPW溶液的用途是纯化和培养原生质体 （ × ）
3．原生质体对称融合的产物一定是形成集双亲核、质遗传物质于一体的体细胞杂种 （ × ） 5．在配制生长调节物质时，生长素一般先用少量95%酒精或0.1 M的NaOH溶解，然后定容。( √ ) 6．胚状体的形成必须先诱导愈伤组织，然后从愈伤组织分化胚状体，否则不能获得胚状体（ × ） 7．花药或花粉培养时，不经任何加倍处理也可获得胚状体 （ √ ） 8．农杆菌介导的遗传转化中，T-DNA倾向于插入转录非活跃区 （ × ） 9．双侧标记选择比单标记选择目标基因的正确率要高 （ √ ）
1．禾本科植物花药培养不易出现白化苗,而双子叶植物的白化苗频率较高 （ × ） 2．常用FDA检测原生质体活力,配制FDA储备液的方法是将其溶于酒精中 （ × ） 3．A物种与B物种原生质体融合应该用 A(+)B表示 （ √ ）
4．农杆菌介导的遗传转化中,T-DNA的转移对左边界具有绝对的依赖性 (× ) 5．对培养基进行灭菌处理时，灭菌需要的时间与培养基的体积有关 （ √ ） 6．在进行愈伤组织诱导时，外植体的大小对愈伤组织的诱导效果有影响（ √ ） 7．一般来说，单核靠边期是花药培养诱导单倍体的最有效的时期 （ √ ）
8．对转基因植物检测时，如果PCR扩增出目的基因特异带，说明外源基因一定插入到了植物基因组 （ × ）9．数量性状受少数主效基因控制 （ × ）10．RFLP标记一般呈显性遗传的特点（ × ）
1．高温高压灭菌需要的时间都是在规定的温度和压力下保持15分钟 （ × ） 2．MS的无机盐和离子浓度较高，养分平衡，是目前使用最多的培养基 （ √ ） 3．培养基中常用的碳源是淀粉 （ × ）
4．成熟胚和幼胚培养对培养基的要求差异不大, 成熟胚培养能成功的培养基也适合于幼胚培养 ( × ) 5．只要一种基因型易于进行体细胞胚胎发生，选用该基因型植物的任何组织或器官都可以诱导体细胞胚胎发生（ × ）6．体细胞胚是一个二极结构，不物理地附着于原组织 （ √ ）
7．胚状体的诱导多需要生长素的参与，但胚状体的发育需要去除生长素或降低生长素的浓度 （ √ ） 8．一般情况下单核靠边期的花药培养易于获得成功 （ √ ）
9．细胞杂交的主要用途是克服有性杂交的不亲和性，创造育种新种质 （ √ ） 10．胞质杂种是指双亲或其中一方的核遗传物质出现了丢失 ( × ) 11．T-DNA整合进植物基因组是通过同源重组进行的 （ × ）
12．在转基因过程中，外源基因能否表达的关键是它能否整合进基因组并遗传下去（ × ） 1. pH值对培养基的凝固没有直接影响 （ × ）
2. KM8P培养基主要用于原生质体培养 （ √ ）
3. 植物生长调节物质在配制母液时需要先用少量的盐酸溶解，然后再用水定容到刻度 （ × ） 4. 利用胚乳培养可以获得三倍体, 为作物的倍性育种提供新材料 (√ )
5. 植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织（ √ ） 6. 由体细胞产生的类胚结构称为胚状体 （ √ ）
7．供体植株的生长条件对花药培养效果没有任何影响 （ × ）
8．双子叶植物在花药培养时比单子叶植物产生白化苗现象严重 （ × ） 9．密度对原生质体的培养效果影响不大 （ × ）
10. 在T-DNA的转移中左右边界同样重要，缺失其中之一不能实现T-DNA的转移（×） 11．T-DNA整合进植物基因组时优先整合到转录活跃的植物基因位点 （ √ ）
12．转基因操作前需要对农杆菌进行活化培养，活化培养的温度应在280C以上 （ × ） 四、简答题
1． 简述开展原生质体融合研究的意义（或用途）
克服有性杂交不亲和和生殖障碍 , 转移有利的农艺性状，创造新的种质材料 ,转移胞质基因，为研究体细胞遗传提供途径和材料
2． 简述分子标记辅助选择的优势 ( a) 利用分子标记直接选择基因型 b) 克服性状鉴定的困难 c) 允许早期选择， d) 多性状/基因选择 e) 全基因组选择 f) 显著地减轻连锁累赘的程度 g) 加快育种进程，减少群体规模，提高育种效率
3. PCL原理：高温双链DNA解链——降温与人工引物结合——中温聚合互补DNA链——重复
3． 叙述基因枪转基因方法的优缺点
优点：①无宿主限制；②靶受体类型十分广泛，几乎包括所有具有潜在分化能力的组织或细胞；③有特殊的应用，可将外源DNA转入线粒体、叶绿体，也可用于花粉转化、作图法基因克隆、启动子研究、与根癌农杆菌协同转化等；④易于操作；⑤一枪可以命中多个目标；⑥细胞遭粒子轰炸后仍能成活；⑦这一方法仅与一些物理参数有关。
缺点: 转化频率低、嵌合体较多、结果的重复性差且转化的外源基因以多拷贝居多易导致基因沉默,遗传稳定性差，而且实验成本较高。
4． 植物转基因研究中使用的转基因技术有哪些？
a) 整株感染; b) 叶盘法; c) 基因枪法; d) 点激法; e) PEG转化法; f) 花粉管通道法; g) 超声波转化法; h) 浸泡法
5． 小孢子培养与花药培养相比具有哪些优势？
a) 花药培养有时会由于花药中的有害物质而不能诱导小孢子启动第一次分裂，小孢子培养则不存在这一问题；
b) 花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含有因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体细胞植株；
c) 由于起始材料是小孢子，获得的材料总是纯合的，不管它是二倍体还是三倍体；
d) 小孢子培养可观察到由单个细胞开始雄核发育的全过程，是一个很好的遗传与发育研究的材料体系；
e) 由于花粉能均匀地接触化学的和物理的诱变因素，花粉是研究吸收、转化和诱变的理想材料。 以棉花为例，根癌农杆菌转化的具体技术
1． 农杆菌菌株的培养，2.无菌苗制备，3棉花外植体与农杆菌的共培养，4、诱导愈伤组织及
抗性愈伤组织的筛选，5愈伤组织的增殖培养，6.愈伤组织的分化，7再生植株的分化
脱毒方法及原理热处理脱毒：高温短时处理，地热长时处理；2.组织培养脱毒：茎尖培养脱毒，茎尖微芽嫁接脱毒，其他外植体的组织培养方法脱毒3合并使用热处理、茎尖培养或微芽茎尖嫁接脱毒，冷处理结合茎尖培养，化学处理结合茎尖培养，合并使用药剂、热处理，培育株心苗 离体快速体系的建立
1. 无菌培养系的建立，2诱导外植体生长与分化，3促进中间繁殖体的增殖，4壮苗与生
根，5.试管苗移栽与管护
载体需要的条件
1. 克隆载体的DNA分子上通常含有1个或者多个克隆位点供外源的DNA片段插入到克隆载
体上 2. 携带有外源的DNA片段进入到宿主细胞中能够进行自我复制，或者外源的DNA片段能够
整合染色体随着染色体的DNA复制而同步进行自我复制 3. 载体必须具有可供选择的标记
4. 载体必须是安全的，不含有对受体细胞有害的基因，对于细胞的生长不会产生显著的影响 6． 简述转基因植物的检测方法
a) 分子技术鉴定 如Southern杂交，PCR等分子标记分析 b) 目标性状鉴定及外源基因的表达 c) 遗传学分析
1．为什么要进行继代培养？经过诱导培养一段时间后，培养基里的养分耗尽；培养基已干燥； 生长物已充满培养瓶；培养物需要扩繁；琼脂培养基褐化或发黑 （因为植物组织在培养前几周有时会产生毒素物质，这些物质会扩散进入培养基）；需要让培养物在一种新的营养条件下生长；培养基由于植物材料的原因使pH降低，导致培养基液化。
1植物生物技术复习题
