TAP-1、TAP-2及HLA-Ⅰ在鼻咽癌中的表达及临床意义

TAP-1、TAP-2及HLA-I在鼻咽癌中的表达及临床意义

任艳鑫1，李晓江1，张丽娟2，杨 洁1，孙瑞梅1，张世文1，张 吉1

【摘 要】摘要：目的 探讨鼻咽癌组织中MHC-I类分子抗原加工提呈“操纵子”(即TAP-1、TAP-2及HLA-I)表达的变化及其与临床因素的关系。方法 免疫组织化学法(IHC)检测鼻咽癌石蜡切片中TAP-1、TAP-2及HLA-I的表达，采用流式细胞仪(FCM)检测鼻咽癌患者及对照组外周血中CD4+T、CD8+ T细胞比例，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测空腹外周静脉血IL-10含量，并对以上结果进行统计分析。结果 TAP-1、TAP-2及HLA-I在鼻咽癌组织中表达分别为43.1%、46.55%、50%，均低于鼻咽正常组织中的表达90%、95%、95%(P<0.05)；鼻咽癌组CD4+T细胞比例明显低于对照组[(33.41±10.04)% vs.(40.15±3.56)%](P<0.05)，CD8+ T细胞比例与对照组比较差异无统计学意义[(25.32±8.29)% vs.(22.89±2.24)%，P>0.05]，鼻咽癌IL-10表达明显高于对照组[(13.12±1.23)ng/mL vs.(3.69±1.03)ng/mL，P<0.05]；TAP-1、TAP-2及HLA-I表达与年龄、性别无相关性(P>0.05)，与TNM分期、有无淋巴结转移及有无远处转移密切相关(P<0.05)；CD8+T细胞比例与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达成正比，IL-10表达与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达成反比，而CD4+T细胞比例与TAP-1、TAP-2及HLA-I表达无明显相关性；Kaplan-Meier分析提示，临床分期、有无淋巴结转移、有无远处器官转移、病理分型、TAP-1表达、TAP-2表达、HLA-I表达与鼻咽癌患者预后相关，差异具有统计学意义(P<0.05)；Logistic回归模型分析显示，有无远处器官转移及HLA-I表达为鼻咽癌患者独立预后因素(P=0.043，P=0.045)。结论 鼻咽癌中TAP-1、TAP-2及HLA-I低表达，且与患者免疫功能低下相关；远处器官转移及HLA-I

低表达预示鼻咽癌患者预后不良。

【期刊名称】西安交通大学学报（医学版） 【年(卷),期】2014(035)004 【总页数】7

【关键词】鼻咽癌；抗原处理相关转运体蛋白-1； 抗原处理相关转运体蛋白-2；人类白细胞抗原-I；转移 ◇临床研究◇

鼻咽癌是中国南方及东南亚地区常见恶性肿瘤之一，其发病与EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)感染密切相关[1-2]。然而，仅仅感染EBV还不足以导致细胞癌变，机体的某些因素也起着重要的作用，细胞介导的免疫反应是机体清除恶性细胞的主要机制。TAP主要功能是与低分子多肽复合物-2、7(1ow molecular mass polypeptide, LMP-2、7)一起加工、转运内源性抗原肽(其中包括肿瘤抗原)至内质网，在内质网锚定的MHC(主要是HLA-I)结合抗原肽后将其呈递至细胞表面供CD8+细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)识别，从而启动细胞免疫。细胞免疫在机体抗肿瘤免疫中具有重要作用。HLA-I类分子肿瘤抗原可组成T细胞激活的第一信号，激活HLA特异性CD8+CTL，发挥抗肿瘤免疫效应。研究发现，在小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤、头颈恶性肿瘤及脑恶性肿瘤中都发现TAP-1、LMP-2/7及HLA-1的缺失或下调，转染TAP-1后可诱导LMP-2/7及HLA-I表达的增加[3-6]。本文着重研究鼻咽部组织中TAP-1、TAP-2及HLA-I的表达及其对鼻咽癌患者免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验标本 选取2000年1月至2002年12月我院病理科存档的蜡块标本共78例(均为活检和手术切除的标本)，其中包括鼻咽部非特异性炎症组织20例(入选对照组者均为患者自感不适，经本人及家属同意在我院行鼻咽部取材，病理检查排除)，鼻咽癌标本58例(患者临床资料见表1)。所有标本经免疫组化证实且为治疗前收集，血液标本每人取外周血2 mL，肝素抗凝，所有标本采集之前均经患者同意。所有鼻咽癌患者在病理确诊后根据NCCN指南(头颈部肿瘤临床实践指南)进行治疗。Ⅰ期患者接受根治性放疗，Ⅱ期+Ⅲ期及无远处转移的Ⅳ期患者接受TPU化疗4～6周期以及根治性放疗，有远处转移的Ⅳ期患者接受TPU化疗6周期以及姑息性放疗，患者均接受定期随访。

1.2 实验试剂 兔抗人HLA-I多克隆抗体购自美国Epitomics公司，兔抗人TAP-1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗人TAP-2单克隆抗体购自香港Abcam公司，IL-10酶联免疫检测试剂盒购自美国Biosource公司，SP免疫组化通用试剂盒购自北京中山公司，PE标记的鼠抗人CD8，FITC标记的鼠抗人CD4抗体，PC5标记的鼠抗人CD45抗体，同型对照分别为PE标记的鼠抗人IgG免疫球蛋白，FITC标记的鼠抗人IgG免疫球蛋白试剂均为Beckman Coulter公司提供。

1.3 免疫组织化学方法 将中性甲醛固定、石蜡包埋的鼻咽部组织标本制成4 μm厚的切片，采用SP免疫组化染色。用购自北京中杉公司的阳性对照片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。主要步骤：①石蜡切片脱蜡到水。②微波抗原修复。③30 mL/L H2O2-甲醇溶液浸泡10 min。④加100 mL/L山羊血清置室温20 min。⑤加一抗工作液4 ℃孵育过夜。⑥加生物素化二抗工作液，37 ℃孵育10 min。⑦加HRP标记链霉卵白素工作液，37 ℃孵育10