针刺神庭、百会对缺血再灌注大鼠超微结构的影响
林如辉 1，2，3，李钻芳 2，3，胡海霞 1，2，3，朱晓勤 2，3，毛敬洁 2，3，刘 娇 1，张 蕴 4，陈立典 1
【摘 要】 目的 通过透射电镜观察针刺神庭、百会穴是否减轻缺血再灌注（MCAO）模型大鼠脑病理损伤。 方法 采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，将大鼠分为假手术组、模型组、针刺组3组，各组10只。其中假手术组置于普通笼中饲养，只给予同等条件抓取，不给予任何治疗；模型组造模后回笼饲养，只给予同等条件抓取，不给予任何治疗；电针组取大鼠神庭和百会穴，应用GM101电针仪，电压峰值6V，以针体轻轻抖动为度，疏密波频率1～20 Hz，每次30 min，每天1次。干预完成后取材、制样，透射电镜观察3组脑神经元及血管超微结构的变化情况。 结果 缺血再灌注后脑组织神经元及血管超微结构有病理性改变，但针刺组病理改变较模型组病理轻，与假手术组接近。 结论 针刺神庭、百会可有效减轻MCAO大鼠脑神经元及脑内血管病理损伤。
【期刊名称】福建中医药 【年(卷),期】2013(044)006 【总页数】3
【关键词】督脉；缺血再灌注模型；神庭；百会；超微结构
最近研究显示：在中国大城市脑血管病是第三位死亡原因，而在农村女性中为首位死亡原因，在男性中则为第二位［1］。缺血性脑卒中居中医四大顽证（风、痨、臌、膈）之首，为中西医重点研究的疾病之一，该病最核心的问题是神经系统损害引起的神经功能障碍，其主要表现在语言、运动、思维及情绪等方面
［2-4］。有研究表明针刺督脉、阳明经等穴，能够改善脑卒中后的认知功能障碍。课题组前期实验［5］从NF-kB信号通路探讨针刺MCAO大鼠神庭、百会后蛋白的变化，结果表明经电针刺激后大鼠脑内NF-kBp65、p-IkB 表达水平下降，而 IkB、Bax、Fas水平上升，与模型组比较明显抑制了NF-kB的活性，从而起到抑制神经元凋亡的作用，证明了针刺神庭、百会可以通过NF-kB信号通路改善大鼠认知功能障碍的作用机制。本文拟在前期实验基础上观察电针MCAO大鼠神庭、百会后的脑超微结构变化情况，以进一步阐明针刺神庭、百会后改善MCAO大鼠认知功能障碍的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 30只清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠，体重（260＋20）g，由福建中医药大学实验动物中心提供［许可证号：SYXK（闽）2005—004］。适应性喂养1周后，用随机数字表法将大鼠编号。
1.2 仪器 H-7650透射电镜（日本Hitach公司）；电镜CCD相机-图像采集分析系统（德国Soft-Imaging-System公司）；UC-6超薄切片机（德国Leica公司）。 1.3 方法
1.3.1 造模 依据文献［6］，术前所有实验动物禁食12 h。大鼠称重后，以腹腔注射水合氯醛3 mL／kg麻醉。分离并暴露左侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉及其深部分支翼腭动脉。依次结扎颈总动脉近心端、颈外动脉远心端，并于颈总动脉分叉处近心端预留结扎线。用微动脉夹夹闭翼腭动脉及远端颈内动脉。距颈总动脉分叉处1.0 mm处用显微剪刀剪一切口，将备好的线栓插入颈内动脉，插入长度约18.0～22.0 mm至大脑前动脉近端，完全阻断大脑中动脉血
供。缚紧预先放置于颈总动脉的结扎线，颈部伤口常规缝合。2 h后，轻柔回抽线栓至颈总动脉分叉处。术中和术后保持室温25℃左右，用白炽灯照射动物，使其肛温维持在（37±1）℃，直到恢复活动。假手术组只分离动脉，不结扎、插线。手术结束后，动物置于室温（25℃）环境下苏醒，正常饮食。
1.3.2 实验分组及干预 ①假手术组：置于普通笼中饲养，只给予同等条件抓取，不给予任何治疗；②模型组：造模后回笼饲养，只给予同等条件抓取，不给予任何治疗；③ 针刺组：参考《实验针灸学》取大鼠神庭和百会穴，应用GM101电针仪，电压峰值6V，以针体轻轻抖动为度，疏密波，频率1～20 Hz。每次30 min，每天1次，共7 d。手术后2 h开始治疗，直至第7天动物被处死。各组10只。
1.3.3 电镜制样及观察 依据文献［7］，按实验要求将大鼠麻醉，开胸，生理盐水200 mL经左心室快速冲洗，4%多聚甲醛（pH＝7.4）400 mL灌流固定。取脑后置入4%多聚甲醛内 4℃ 固定24～48 h，经3%戊二醛-1.5%多聚甲醛前固定24 h，1%锇酸后固定 2 h，0.1 mol／L 磷酸盐缓冲液（pH7.2）充分浸洗；50%～100%酒精-丙酮梯度脱水，每次15 min；半浸透 37℃ 1.5 h，纯浸透 37℃ 3 h，包埋后在37℃、45℃、60℃分别聚合12、40、48 h。超薄切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色。透射电镜下观察切片，先在低倍下全面观察，再详细观察细胞的外形、细胞核及细胞器。
2 结 果
2.1 针刺干预MCAO大鼠脑神经元超微结构观察见图1。电镜观察假手术组：神经元细胞大多呈长椭圆形，膜完整，表面突起较多；核大，呈圆形或椭圆形，表面核孔丰富，染色质分布均匀，异染色质无边聚；细胞内线粒体丰富，截面
针刺神庭、百会对缺血再灌注大鼠超微结构的影响
