易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性
王玉满;薛正莲;王洲;苏燕南;朱昊;
【期刊名称】《安徽工程大学学报》 【年(卷),期】2016(031)004
【摘要】利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg2＋、Mn2＋得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a（＋）重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5%,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41%.序列分析表明：plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是Y97 C、P98S、X228 L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是P46 L、Q58 L、N136 D、H233 R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材. 【总页数】6页(P.6-11)
【关键词】粘质沙雷氏菌 磷脂酶A1 易错PCR 产酶条件优化 【作者】王玉满;薛正莲;王洲;苏燕南;朱昊;
【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院,安徽芜湖241000;;;;; 【正文语种】英文 【中图分类】Q786 【相关文献】
1.易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性 [J], 王玉满; 薛正莲; 王洲; 苏燕南; 朱昊
2.粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1在大肠杆菌中的分泌表达及其条件优化 [J], 陈环; 薛正莲; 王洲; 张爽; 苏燕南; 胡艳瑾
3.液化沙雷氏菌磷脂酶A1的克隆表达及乳糖自诱导发酵 [J], 延晋雷; 张梁; 顾正华; 丁重阳; 石贵阳
4.采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化 [J], 刘治江; 贺淹才; 李红然; 刘嘉; 施腾鑫
5.基于易错PCR技术的黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA的定向进化 [J], 陈英; 朱绮霞; 张搏; 陈东; 黄日波
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易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性
