茶树胞质型苹果酸脱氢酶的原核表达及生物信息学分析

茶树胞质型苹果酸脱氢酶的原核表达及生物信息学分析

陈露露;翟羽佳;王鹏;王晖;郝家胜;朱国萍

【期刊名称】《植物分类与资源学报》 【年(卷),期】2010(032)001

【摘要】利用RT-PCR及cDNA末端快速扩增法,获得了完整的茶树细胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)基因Cs-cMDH(GonBank登录号为GQ845406).该基因全长1 235 bp,编码332个氨基酸,分子量约为35.5kD.含重组质粒pGEX-MDH的E.coli Rosetta经0.5 mmol·L~(-1) IPTG于32℃诱导3 h后可以获得大量可溶性的61.5 kD融合蛋白.NCBI的BLAST结果显示,Cs-cMDH与高等植物cMDH的氨基酸序列一致性高达88%～93%.通过基于蛋白质结构的多序列比对,预测Cs-cMDH为二聚体,每个亚基包含13个β-折叠及13个a-螺旋.Cs-cMDH包含典型的MDH\指纹\序列G~(12)AAGQIG~(18),其氨基酸残基D43在所有NAD-MDH中都很保守.Cs-cMDH还包含一些与其它NAD-MDHs同源的保守序列单元,如NAD+结合位点、催化模体及底物结合位点.而且Cs-cMDH还包含在所有植物NAD-cMDHs中都相当保守的6个Cys,因此我们推断Cs-cMDH为茶树细胞质NAD-MDH.茶树基础代谢相关基因cMDH的克隆和原核表达为Cs-cMDH的功能研究奠定了基础. 【总页数】9页(32-40)

【关键词】茶树;胞质型苹果酸脱氢酶;RT-PCR;cDNA末端快速扩增法;序列分析;二级结构

【作者】陈露露;翟羽佳;王鹏;王晖;郝家胜;朱国萍

【作者单位】安徽师范大学生命科学学院分子进化与生物多样性重点实验室,安