药理学实验方法

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第－讲 实验动物的选择

在药理学实验中，要根据实验目的，选择不同动物，常用动物有： １、青蛙和蟾蜍

心脏（离体、在体）实验, 制备坐骨Ｎ－腓肠标本等。 ２、小白鼠：

药物初筛：镇痛、耐缺氧、抗肿瘤药物、LD５０测定、避孕药实验等。 ３、大白鼠：

抗炎作用，大白鼠踝关节肿胀实验， 血压测量，胆管插管等。 长期性毒性试验。 ４、豚鼠：

对组胺敏感，并易于致敏，常用抗过敏药（平喘药、抗组胺药）实验。离体心房、心脏、肠管实验等。

豚鼠对结核菌也敏感，也用于抗结核病药物实验。

5、 兔：

家兔易得，驯服，便于静脉注射和灌胃，常用于观察药物对心脏的作用和对CNS

的作用。

又由于其体温变化较敏感，也常用于体温实验及热原检查。 家兔也常用于避孕药实验。

6、 猫：

猫的血压比较稳定，具有咳咳嗽反射和呕吐动作。因而常用于心血管药物实验和镇咳药、镇吐药实验。

7、 狗：

狗的血压比较稳定，常用于降压药、升压药和抗休克药实验。

狗比较容易驯服，最适用于慢性实验。手术造瘘（胃、肠）以便观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。

此外，长期毒性实验也常用狗来进行。

* 附:给药途径及剂量限制

1. 小白鼠

（1） 灌畏法:0.1～0.25ml／10g体重。 （2） 皮下注射：0.1～0.3ml／10g体重。 （3） 肌肉注射：0.2ml／每侧。 （4） 腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。 （5） 静脉注射：0.05～0.1ml／10g体重。 1. 大白鼠

（1） 灌畏法:2.0ml／10og体重。<3.0ml/只。 （2） 腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。

第二讲 实验动物的麻醉和处死

一、各种实验动物的麻醉药物和麻醉方法

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1、乙醚

乙醚为挥发性麻醉药。常用于小动物（小鼠）的麻醉。使用方法有：开放

发和封闭法。

2、 戊巴比妥钠

戊巴比妥钠的作用稳定、麻醉持续时间中等(一次给药可维持作用2～4

hr)，一般实验均可使用。 常用其3% 溶液。

各种动物所用剂量如下： 狗：30mg/kg， iv

猫、兔：30～40mg/kg，iv或ip 大鼠、小鼠：40～50mg/kg，ip

3、 乌拉坦

乌拉坦的作用较弱，对呼吸的抑制作用小是其优点。是动物实验常用的

麻醉药。

各种动物所用剂量如下：

家兔、大鼠：1.0～1.5 g/kg，iv或ip

4、 氯醛糖

氯醛糖对血压和神经反射影响较小，适用于心血管实验。 但其溶解度小，常用浓度为1% 。 动物所用剂量如下：

狗、猫：80～100mg./kg，iv或ip。常与戊巴比妥钠或乌拉坦合用，合用时应减少剂量。

二、动物的处死

（一） 乙醚吸入法

小鼠、大鼠：吸入乙醚后20～30秒钟进入麻醉壮态，3～5分钟死亡。

鸽、猫等较大动物也可用次法处死。

但需注意以下两点：

当用次法处死豚鼠时，脑和肺部可出现小出血点，在进行病理解

剖时要特别注意。

1·

2· 焚烧动物尸体时要注意防止火灾发生。

(二) 二氧化碳吸入法

可将动物装入减压干燥器或塑料袋内，通以CO2，可在本30秒～3分钟

内杀死动物。

豚鼠、猫、鸽等均可用此法处死。

（三） 注射麻醉法

常用药物为巴比妥钠，各种动物所需剂量如下：

鸽：100mg/kg，ip。

猫：60～120mg/kg，iv或ip。

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狗：100mg/kg，iv。 兔：75～100mg/kg，iv。

（四） 颈椎脱臼法

此法常用于小白鼠的处死。

（五） 空气栓塞法

将空气注入静脉或心腔内造成栓塞。各种动物所需剂量如下：

兔、猫：10～20ml/只。 狗：70～150ml/只。

（六） 心脏取血法

豚鼠、猴可用此法。

（七） 大量放血法

兔、猫、猴、狗等可用此法。

（八） 电击法

220 V交流电，接上粗针头，一头插入颈部皮下，一头插入腰部皮下，

通以电流。

第三讲 药理学实验设计

第一节 药理学实验设计的基本要求

实验设计的三大原则──重复，随机，对照。

（一）重复

影响因素设法控制：

1、 动物：品种、体重、年令、性别、饲养条件。…… 2、 药物：批号、纯度、剂量、注射容量、速度。…… 3、 仪器：灵敏度、精确度、电压稳定性。…… 4、 其它：室温、气压、季节、上、下午。……

条件控制越严格，重复性越高，但样品的代表性越差，这是一个不可避免的矛盾。一般先严后松，逐渐扩大实验范围。

（二）随机

随机分组的目的，使各组间不受主观因素的影响，方法：编号抽签或随机数字表法。 目前主张“均衡下的随机”，即先将主要因素（体重， 性别等）均衡归类分档，再将难控制的因素（活泼程度 饥饱程度 疲劳程度 性周期……）随机安排。

（三）对照

1、

阴性对照（空白对照）──N.S.

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2、阳性对照（标准品组），目的是查明：

（1） 实验条件是不是发生了改变。 （2） 判断和对比试药的作用。

注意：

（1） 同时，同地，同条件下进行对照。

（2）统计学指出：实验组与对照组例数相等时最节省动物。因此，对照组使用较少动物是不妥当的。 第二节 预试与筛选

（一） 预试

目的：了解各种因素对实验的影响，找出最适当的用药计量，最适实验条件（温

度，刺激强度，营养液配方……）。为正式实验提供必要的准备。 应注意的问题：

1. 实验的稳定性：用变异系数衡量。

S 变异系数 CV= ── X

变异系数越小，可重复性越强。 列如：

某降压药降压结果为:30 ? 5 mm Hg (猫) 25 ? 9 mm Hg (兔)

变异系数 CV(猫)= 5/30 =16.7% CV(兔) = 9/25 = 36%

因此,做降压药实验用猫较兔为好。 2 .实验灵敏性：用因变系数衡量。

E2－E1

因变系数CI = ──────── ， log D2 －log D1

可反映出实验的灵敏度。 D1’ D2为两个不同剂量。 E1 E2为两个不同反应强度。

例如，某利尿药水负荷实验结果如下表：

负荷水种类

利尿药剂量 尿量

生理盐水 2.0 mg/kg 12.4 ml (A) 4.0mg/kg 19.6 ml

自来水 2.0mg/kg 15.6 ml (B) 4.0mg/kg 20.9 ml

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19.6 – 12.4

CIA = = 23.9 log 4 – log 2

20.9 – 15.6

CIB = = 17.6 log 4 – log 2

从以上实验结果应可以看出，本实验应该使用生理盐水作负荷剂。

（二） 筛选

是在预试或以往经验的基础上，用少量动物对多种药物进行实验。筛选常在已知反应率的基础上进行，一般以P〈0.1作为筛选合格的标准。

1、 保护实验：

筛选解毒药时，将解毒药+毒物量（LD50），如连用4只动物均不死亡，表明该药有一定解毒作用（P < 0.1）,如一只死亡，再加三只，如三只均无死亡，也认为筛选合格。总之，死亡率为0/4、1/7、2/9、3/12、4/14时都可认为合格（P < 0.1）。

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