多年生黑麦草质膜型水通道蛋白基因LpAQP的克隆及功能
分析
周春蕾;李仁;吴新新;杨荣超;张海军;张娜;赵冰;郭仰东
【期刊名称】《中国农业科学》 【年(卷),期】2013(046)012
【摘要】[目的]研究黑麦草在逆境胁迫下水分代谢的基因调控,克隆黑麦草质膜型水通道蛋白基因的全长cDNA序列,并对其表达模式进行研究.[方法]利用RACE技术从黑麦草(品种“顶峰”)中获得LpAQP全长cDNA序列；运用生物信息学软件分析其编码蛋白；构建LpAQP与GFP融合的瞬时表达载体,采用基因枪法转入洋葱表皮细胞,观察其细胞定位；通过real time-PCR分析LpAQP的表达模式,并用Southern杂交分析其拷贝数.[结果]克隆获得LpAQP的cDNA序列,GenBank登录号为JX569791,其开放阅读框(0RF)为867bp,编码288个氨基酸,蛋白质分子量为30.7 kD.该基因含有2个NPA单元,6个跨膜区,LpAQP含有与MIP家族完全一致的蛋白质保守区,其氨基酸序列与其它禾本科PIP类质膜型水通道蛋白同源性较高.物种间聚类分析表明LpAQP与大麦、小麦质膜型水通道蛋白同源性较高.LpAQP可能定位于细胞质膜上.通过Southern杂交分析,发现LpAQP在黑麦草基因组中以单拷贝存在.real time-PCR分析表明LpAQP在黑麦草茎部表达高于叶和根,持续干旱胁迫会导致LpAQP表达量先上调后下降.[结论]克隆获得黑麦草质膜型水通道蛋白基因LpAQP,其以单拷贝形式存在,在黑麦草根、茎、叶中均有表达,尤其是茎中表达最高.其表达受干旱胁迫影响.%[Objective] To provide an insight into mechanism of drought resistance and cultivar development in Lolium
多年生黑麦草质膜型水通道蛋白基因LpAQP的克隆及功能分析
