食品微生物检验技术课程综述
时间：2024.02.02 创作：欧阳术 大肠杆菌的检测（MPN计数法） 院系： 食品科学与药学学院 班级： 食科114 姓名： 张花 学号： 114031431 组长： 张军玲 成员： 张花 赵晶郁 朱娟娟
大肠杆菌Petrifilm测试片计数法
摘要
食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂
欧阳术创编 2024.02.02 欧阳美创编 2024.02.02
便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词 大肠杆菌 Petrifilm测试法 1设备和材料
1.1恒温培养箱：36±1℃。 1.2冰箱2~5℃。
1.3恒温水浴箱 :44.5±0.2℃。 1.4天平：感量0.1g。 1.5均质器 1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL(具0.01 mL刻度)、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 1.8无菌锥形瓶：容量500mL。 1.9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸 1.11试管架。 2. 培养基和试剂
2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。 2.2EC肉汤。 2.3蛋白胨水。
2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP-VP实验用）。
欧阳术创编 2024.02.02 欧阳美创编 2024.02.02
欧阳术创编 2024.02.02 欧阳美创编 2024.02.02
2.5磷酸盐缓冲液。
2.6无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，
121℃高压灭菌15min。
2.71mol/L氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ) ：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。 3检验程序 4.样品稀释
4.1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1～2min,做成1:10的样品均匀稀释液）。
4.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。
4.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaOH )或1mol/L 盐酸（HCI )调节。
4.4用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
欧阳术创编 2024.02.02 欧阳美创编 2024.02.02
大肠杆菌的检测(MPN计数法)之欧阳术创编
