湛江水产品中大肠菌群的分离鉴定与分类研究

湛江水产品中大肠菌群的分离鉴定与分类研究

聂芳红1，谢日东1，雷晓凌1，丁秀琼2

【摘 要】水产品中大肠菌群超标现象较为常见，为了更好地控制水产品中微生物安全，对湛江部分水产品中的大肠菌群进行分离、鉴定和分类研究。2012年11月～2013年1月，从湛江地区采集及获得的55份大肠菌群阳性水产品样品中分离纯化得到65株菌，通过常规生化鉴定和VITEK2系统鉴定，最终确定63株分别属于8种大肠菌群，其中弗氏柠檬酸杆菌24株、大肠埃希氏菌14株、阴沟肠杆菌13株、肺炎克雷伯氏菌7株、其他大肠菌类型5株，分别占菌株鉴定总数的38.10%、22.22%、20.63%、11.11%、7.93%，另有2株细菌未鉴定出所属大肠菌类型。不同种类水产品均检出弗氏柠檬酸杆菌；冻罗非鱼片大肠菌群主要为弗氏柠檬酸杆菌和阴沟肠杆菌，占本样品检出菌株的77.27%；而鲜活对虾和贝类大肠菌群类型主要为弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌，占本类样品检出菌株的65.79%；对于冷冻水产品，均未检出大肠埃希氏菌，未经加工的水产品较加工水产品大肠菌群种类多。 【期刊名称】广东农业科学 【年(卷),期】2014(041)006 【总页数】6

【关键词】水产品；大肠菌群；鉴定；菌群分类

大肠菌群分布较广，在人和动物粪便及自然界中广泛存在。大肠菌群作为食品安全的重要微生物指标，是判断食品是否被粪便污染的指示菌。大肠菌群与肠道致病菌之间有着密切的同源性，且与多数肠道病原菌存活期相近，若严重超标则预示着存在肠道传染病或食物中毒的潜在危险。因此大肠菌群又作为肠道

致病菌污染食品的一个指示菌[1]，来判断有无肠道致病菌污染的可能性。 大肠菌群（Coliforms）是指在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌[2]，是一组与粪便污染相关的细菌。它主要包括肠杆菌科中的4种常见细菌：大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneuminiae）和阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）[3]。

粪便污染严重影响着我国许多沿海和内陆地区的水体，使水产养殖环境逐年恶化，严重威胁到水产品的质量安全。湛江是广东水产品的主要生产区，总产量连续多年均居广东省首位，其中对虾出口量居全国第一，冻罗非鱼片也远销多个国家和地区。由于湛江全年气温较高，大肠菌群超标情况尤为严重，成为制约水产品质量的重要因素之一，对水产品的出口也有较为重要的影响。迄今，国内尚未见到湛江水产品中大肠菌群种类鉴定的相关报道，因此有必要对水产品中大肠菌群的污染及其种类进行深入研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源 南美白对虾、牡蛎、翡翠贻贝、巴非蛤、鲍螺购自湛江某水产市场，产地湛江。样品购买后充氧并在1 h内运回实验室备检；冻罗非鱼片、冻熟虾、冻面包虾由湛江某检测单位及湛江某水产公司提供，为经检测得到的大肠菌群阳性样品。采样时间2012年11月～2013年1月。

1.1.2 培养基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，煌绿乳糖胆盐肉汤，伊红美蓝（EMB）琼脂，营养琼脂培养基，葡萄糖磷酸盐胨水，色氨酸肉汤，半固体琼脂，西蒙氏柠檬酸盐培养基，明胶培养基，三糖铁琼脂，乳糖发酵培养基，氧

化酶试纸，甲基红试剂，V-P甲、乙液试剂，靛基质试剂，芽孢染色液，荚膜染色液，革兰氏染色试剂盒等，均购自北京陆桥技术有限责任公司；VITEK2革兰氏阴性细菌鉴定卡（GN卡）购自法国生物梅里埃公司。

1.1.3 试验仪器 SPX-250B生化培养箱（上海跃进医疗器械厂），SW-CJ-1F超净工作台（上海博迅实业有限公司），XSP-2CA双目生物显微镜 （上海光学仪器厂），LS-B50L立式压力蒸汽灭菌器 （上海华线医用核子仪器有限公司），HH-6数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），VITEK 2全自动微生物鉴定仪 （法国生物梅里埃公司）等。 1.2 试验方法

1.2.1 大肠菌群的检测 从市场购买的贝类和南美白对虾首先要进行大肠菌群的检测，筛选出大肠菌群阳性样品，以便进行大肠菌群菌株的分离和纯化。 （1）取样：在清洁流水中洗净贝类和南美白对虾，贝类外壳用75%酒精消毒后以无菌操作取含内脏的全部贝肉和贝液；南美白对虾用冰块猝死后，用无菌生理盐水冲洗，去皮，取含腮及肠的虾肉，分别置于无菌容器内密封，备检。 （2）检测：分别取样品25 g，参照中华人民共和国国家标准GB 4789.3-2010[2]中大肠菌群MPN计数法的操作步骤进行检测和MPN计数。

1.2.2 菌株分离与纯化 将经检测得到的大肠菌群阳性样品和由湛江某检测单位及湛江某水产公司提供大肠菌群阳性样品分别划线接种于EMB平板上，37℃培养18～24 h；分离挑选单个典型菌落转种到营养琼脂平板上进行分离纯化，37℃培养18～24 h后，进行镜检和生化鉴定；并分别挑选单个典型菌落接到营养琼脂斜面上，37℃培养 18～24 h，备查。

1.2.3 菌株鉴定（1）菌落形态的观察：观察EMB平板上单个菌落的形态特征，