食用菌栽培种的制作与培养-实验三

实验三、食用菌栽培种的制作与培养

一、目的要求：

1、了解栽培种培养料的配制原理及过程； 2、掌握培养料的配制方法。

二、主要仪器设备及药品材料：

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、铁铲、电子称、绣花针、水桶、聚丙烯菌种袋（12厘米×24厘米）、耐高温皮筋、接种铲、75%酒精、石灰粉、石膏粉、玉米芯颗粒、棉籽皮、玉米粉、平菇原种（夏福2号）、香菇原种（丰产1号）。

三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 配方

平菇：玉米芯87%、玉米粉10%、石灰粉3%。（料水比：1:1.5）。 香菇：棉籽皮88%、玉米粉10%、石膏粉2%。（料水比：1:1.2）。 2.培养基的配制

（1）拌料。按配方中各种营养成分的配比称量各种原料，并混合在一起。称取自来水，泼洒到干料中，搅拌均匀。堆闷24小时。

（2）测培养料含水量。培养料拌好后，用手抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水渗出但不下滴，含水量为60%-65%，若含水量不足，可再加少量的水，充分搅拌均匀，再检测，直至含水量合适为止。

（3）测培养料PH值。用PH试纸测定两种培养料的PH值。平菇栽培种培养料PH值为8-9，香菇栽培种培养料PH值为6.5。

（4）装袋。 将拌好的培养料装入聚丙烯塑料袋中，边装边压实，注意装袋松紧适度，用手指按压有弹性。用耐高温皮筋系紧袋口。

（5） 灭菌。121℃,2小时，灭菌结束后，培养料冷却至30℃以下待用。 ②接种与培养

1. 接种。将接种袋放入紫外灯灭菌的无菌操作台。将平菇和香菇原种瓶放入5%的石灰水中消毒。两人合作接种，一人以无菌操作方法

用接种铲捣碎平菇或香菇原种，另一人在酒精灯火焰旁打开栽培种袋口（袋口应倾斜在火焰旁，切勿直立），迅速将原种接到袋中并铺满料面，系紧袋口。用绣花针在有菌种的地方扎8个透气孔。 2. 培养。将栽培袋搬到培养室避光培养，培养室的温度控制在23℃左右。

四、实验结果

每2人制作平菇和香菇栽培种各一袋。记录栽培种菌丝的生长情况及菌

种的外观。

五、作业

1.栽培种的制作与培养过程中，可以从哪些方面来控制杂菌污染？

实验二 食用及药用菌原种制作技术

目的要求：

1、了解原种培养基的配制原理及过程； 2、掌握玉米粒原种的制作方法。

重点与难点:

重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种. 难点: 食用菌组织分离法制作菌种.

教学方法与手段:

本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。

实验内容:

1、按比例计算、称取各组分； 2、添加、混合均匀各组分； 3、培养料水分、pH调节、装袋； 4、原种培养基灭菌； 5、转接、培养原种。 6、原种质量检查

主要仪器设备药品材料：

灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。

实验步骤

一． 原种培养基的制备

1. 选定配方。玉米97%，碳酸钙2%，石膏粉1%，PH6.5-7.0。 2. 培养基配制。选择无病虫害的的玉米粒，用清水冲洗干净，浸泡40小时左右。加水超过玉米粒表面，煮开锅后，小火再煮5-30分钟，使玉米粒充分煮透（胀而不破，切开后无白心）。用清水冲洗冷却，淋去谷粒表面水份。加入碳酸钙和石膏粉，充分搅拌均匀备用。 3. 装瓶封口。将配制好的培养基装入原种瓶中。将玉米粒培养基装至低于瓶肩处。做到培养基均匀一致，松紧适度，料面平整，擦净瓶口内外壁。塞上棉塞，外面用一层牛皮纸包好。

4. 灭菌。分装好的原种瓶在当天灭菌，避免培养基发霉变质。采用高压蒸汽灭菌。灭菌压力1.4-1.5Kg/cm2。灭菌时间为1.5-2小时。冷却至30℃以下待用。

二． 接种

1. 超净工作台消毒灭菌。将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具（酒精灯，接种铲等）放入接种场所，进行消毒灭菌。

2. 接种。将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。点燃酒精灯，用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒，特别是管口处，去下棉塞后，试管口在火焰上烤一下，然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲将母种斜面分成4-6份，将其固定在接种架上，注意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内（管口离火焰1-2厘米）。然后左手持原种瓶，右手取下棉塞，瓶口在火焰上烤一下，用接种铲取一份母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处，棉塞过火后塞好，包上包头纸。如此反复，每支母种可扩接原种4-6瓶。

三． 培养。

将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养，培养温度为25℃。定期检查杂菌发生情况，从培养3-5天开始每天检查一次，当菌丝封住料面并向下深入1-2厘米时，可改为每周检查一次，发现污染的瓶立即淘汰，并隔离污染源。 四． 原种质量检查

无论麦粒原种还是棉籽壳原种，接种后在25℃左右培养20-40天，菌种即可长满瓶。品质优良的原种，菌丝洁白、纯净、有食用菌特有的香味。若出现黄、绿、黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道。不能使用，应将其灭菌后远离培养场地处深埋。

作业

1. 食用菌原种培养基主要有哪些？ 2. 制作原种过程中应该注意哪些问题？