玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 0.4%孔雀绿水溶液。 4.7.4 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 11 页 分别按上述成分配好后，121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。
4.8 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) （可按成品试剂上的说明操作） 4.8.1 成分
蛋白胨 5g 乳糖 4g 亚硒酸氢钠 4g 磷酸氢二钠 5.5g 磷酸二氢钾 4.58 L-胱氨酸 0.01g 蒸馏水 1000mL
4.8.2 1%L-胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法：称取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0.2g)，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。
4.8.3 制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L－肮氨酸－氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7.0±0.1。
4.9 SS琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.9.1 基础培养基
牛肉膏 5g 脙胨 5g 三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保存备用。 4.9.2 完全培养基
基础培养基 100mL 乳糖 10g 柠檬酸钠 8.5g 硫代硫酸钠 8.5g 10%柠檬酸铁溶液 10mL 1%中性红溶液 2.5mL 0.1%煌绿溶液 0.33mL
加热溶化基础培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正至pH7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h内使用。 ②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 ③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 12 页 4.10 三糖铁琼脂(换用方法) （可按成品试剂上的说明操作） 4.10.1 成分
蛋白胨 15g 脙胨 5g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0.3g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 4.10.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
4.11 半固体琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.11.1 成分
蛋白胨 1g 牛肉膏 0.3g 氯化钠 0.5g 琼脂 0.35～0.4g 蒸馏水 100mL pH7.4 4.11.2 制法
按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分装小试管。121℃高压灭菌15min。直立凝固备用。
注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。 4.12 亚硫酸铋琼脂(BS) （可按成品试剂上的说明操作） 4.12.1 成分
蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 葡萄糖 5g 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4g
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 煌绿 0.025g 柠檬酸铋铵 2g 亚硫酸钠 6g
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 13 页 琼脂 18～20g 蒸馏水 1000mL pH7.5 4.12.2 制法
4.12.2.1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。 4.12.2.2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。 4.12.2.3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃
4.12.2.4 将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀。冷至50～55℃，倾注平皿。
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处。 超过48h不宜使用。
4.13 GN增菌液（可按成品试剂上的说明操作） 4.13.1 成分
胰蛋白胨 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 柠檬酸钠 5g 去氧胆酸钠 0.5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.0 4.13.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
4.14 麦康凯琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.14.1 成分
蛋白胨 17g 脙胨 3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 乳糖 10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 4.14.2 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 14 页 4.14.2.1 将蛋白胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。 4.14.2.2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
4.15 葡萄糖半固体发酵管（可按成品试剂上的说明操作） 4.15.1 成分
蛋白胨 1g 牛肉膏 0.3g 氯化钠 0.5g 1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL 葡萄糖 1g 琼脂 0.3g 蒸馏水 100mL pH7.4 4.15.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃ 15 min。
4.16 5%乳糖发酵管（可按成品试剂上的说明操作） 4.16.1 成分
蛋白胨 0.2g 氯化钠 0.5g 乳糖 5g 2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL 蒸馏水 100mL pH7.4 4.16.2 制法
除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。 注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。 4.17 营养肉汤（可按成品试剂上的说明操作） 4.17.1 成分
蛋白陈 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4
4.17.2 制法
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 15 页 按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min 4.18 肠道菌增菌肉汤（可按成品试剂上的说明操作） 4.18.1 成分
蛋白胨1 10g 葡萄糖 5g 牛胆盐 20g 磷酸氢二钠 8g 磷酸二氢钾 2g 煌绿 0.015g 蒸馏水 1000mL 4.18.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH7.2。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。
4.19 氯化钠结晶紫增菌液（可按成品试剂上的说明操作） 4.19.1 成分
蛋白胨 20g 氯化钠 40g 0.01%结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH 9.0 4.19.2 制法
除结晶紫外，其他按上述成分配好，加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4.5mL，校正pH。加热煮沸，过滤。再加入结晶紫溶液，混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。 4.20 氯化钠蔗糖琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.20.1 成分
蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 50g 蔗糖 10g 琼脂 18g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL 蒸馏水 1000mL pH7.8 4.20.2 制法
将牛肉膏、蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热溶解，过滤。加入指示剂，分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g，加热溶化并冷至50℃，倾注平板。
4.21 嗜盐菌选择性琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.21.1 成分
蛋白胨 20g 氯化钠 40g
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书
