玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 3.10.2 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 6 页 先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
3.10.3 试验方法
用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。 3.11 葡葡糖铵培养基（可按成品试剂上的说明操作） 3.11.1 成分
氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖 2g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 3.11.2 制法
先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。 3.11.3 试验方法
用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。 3.12 西蒙氏柠檬酸盐培养基（可用微量发酵管）
3.12.1 成分
氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g 磷酸二氢铵 1g 磷酸氢二钾 1g 柠檬酸钠 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 3.12.2 制法
先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 7 页 分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。 3.12.3 试验方法
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。 3.13 氧化酶试验（可用纸片法） 3.13.1 试剂
3.13.1.1 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。 3.13.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。 3.13.2 试验方法
3.13.2.1 取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。
3.13.2.2 以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。
3.14甲基红(MR)试验（可按成品试剂上的说明操作）
自琼脂斜面挑取少量培养物接种缓冲葡萄糖蛋白胨水中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
3.15 V－P试验（可按成品试剂上的说明操作）
用琼脂培养物接种缓冲葡萄糖蛋白胨水培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
3.16 0.25%氯化钙
氯化钙 2.5 g 蒸馏水 1000 mL
3.17 缓冲葡萄糖蛋白胨水 （可用微量发酵管） 3.17.1 成分
磷酸氢二钾 5g 多胨 7g 葡萄糖 5g 蒸馏水 1000mL pH7.0 3.17.2 制法
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
3.18 3%过氧化氢溶液
30%过氧化氢溶液临用时稀释10倍。 3.19 20%碳酸钠溶液 碳酸钠 20g 灭菌蒸馏水 100mL
3.20 甘露醇发酵培养基（可用微量发酵管）
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 3.20.1成分
牛肉膏 5g 甘露醇 10g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 0.2%麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL 3.20.2 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 8 页 将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，校正pH7.4后，加入甘露醇和指示剂，分装试管，121℃高压灭菌20min。 3.21 1.5%硫代硫酸钠
硫代硫酸钠 15g 蒸馏水 1000mL 121℃高压灭菌20min。 3.22 10%硫代硫酸钠
硫代硫酸钠 100g 蒸馏水 1000mL 121℃高压灭菌20min。 3.23 0.1%硫代硫酸钠肉汤 硫代硫酸钠 1g 肉汤 1000mL 121℃高压灭菌20min。
3.24 3%(W/V)吐温80和0.3%卵磷脂肉汤 吐温80 30g 卵磷脂 3g 肉汤 1000mL 121℃高压灭菌20min。 3.25 0.3%甘氨酸肉汤 甘氨酸 3g 肉汤 1000mL 115℃高压灭菌15min。 3.26 3%(W/V)吐温80 吐温80 30g 肉汤 1000mL 121℃高压灭菌20min。 4 一般培养基和专用培养基
4.1 营养琼脂（可按成品试剂上的说明操作） 4.1.1 成分
蛋白胨 10g 牛肉膏 3g
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000mL 4.1.2 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 9 页 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至 7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼 脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。
4.2 乳糖胆盐发酵管（可按成品试剂上的说明操作） 4.2.1 成分
蛋白胨 20g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 乳糖 10g 0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL pH7.4 4.2.2 制法
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入 一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。 4.3 伊红美蓝琼脂(EMB) （可按成品试剂上的说明操作） 4.3.1 成分
蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 17g 2%伊红Y溶液 20mL 0.65%美蓝溶液 10mL 蒸馏水 1000mL pH7.1 4.3.2 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌 15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
4.4 乳糖发酵管（可用微量发酵管） 4.4.1 成分
蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书 标题：试剂配制 pH7.4 4.4.2 制法
文件编号：YJKZ/ZYW6-001 版号：第 2 版，共 26 页 第 10 页 将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL 或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。 注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
4.5 EC肉汤（可按成品试剂上的说明操作） 4.5.1 成分
胰蛋白胨 20g 3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g 乳糖 5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 4.5.2 制法
将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2。
4.6 缓冲蛋白胨水(BP) （可用微量发酵管） 4.6.1 成分
蛋白胨 10g 氯化钠 5g 磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 9g 磷酸二氢钾 1.5g 蒸馏水 1000mL pH7.2 4.6.2 制法
按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。 注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
4.7 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) （可按成品试剂上的说明操作） 4.7.1 甲液
胰蛋白胨 5g 氯化钠 8g 磷酸二氢钾 1.6g 蒸馏水 1000mL 4.7.2 乙液
氯化镁(化学纯) 40g 蒸馏水 100mL 4.7.3 丙液
24
玉环县疾病预防控制中心作业指导书
