第十七章 厌氧性细菌及检验
本章内容
一、概述 厌氧菌的分类 厌氧菌的临床意义 厌氧菌感染 厌氧菌标本的采集与送检 厌氧菌的分离与鉴定 厌氧环境的指示
二、常见厌氧菌 破伤风杆菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌 厌氧球菌 无芽胞厌氧菌
厌氧菌概述 一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
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G有芽胞的梭菌 ：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。
G/G 无芽胞的球菌与杆菌 ：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性 属条件致病性的内
源性感染。
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厌氧菌概述——分类
《伯杰系统细菌学手册》分类标准：
无芽胞厌氧菌有 40 多个菌属， 300 多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括 据耐氧性分类
（ 1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜ 空气中暴露 10min 致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为 如大多数人类致病厌氧菌）。
（ 2）微需氧菌：能在含 5%～ 10%CO2 空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。 （ 3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。 如第三梭菌、溶组织梭菌。
厌氧菌概述——临床意义及感染
感染类型 外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。
130个种。
0.5%，
2%～8%，空气中暴露 60～ 90min 能生存，
一旦生长， 暴露数小时仍不死亡，
内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一 般不在人群中传播。 感染的危险因素： 组织缺氧缺血； 机体免疫功能下降；
某些手术及创伤易发生厌氧菌感染； 长期应用某些抗菌药物； 深部需氧菌感染。
感染的临床指征： 感染局部产生大量气体； 多发生在黏膜附近； 深部外伤后继发感染； 分泌物有恶臭或为暗红色； 常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例； 镜检有细菌，常规培养阴性。
厌氧菌概述——标本的采集与送检
重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。 适宜标 本 血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖 获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿 刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等 不宜标 鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的 脓液、接近皮肤本
或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外） 等 厌氧菌概述——标本的采集与送检
采集 多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。 厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因 厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。 送检 针筒运送：液体标本。
无菌小瓶运送：液体标本。 棉拭子运送：需使用特制运送培养基。 厌氧罐 / 厌氧袋运送：较大组织块或床边接种的培养皿等。
标本送到实验室后，应在 20～ 30min 内处理完毕，最迟不超过 2h。如不能及时接种，应 室温保存 。
厌氧菌概述——分离与鉴定 直接镜检
根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。 分离培养
初代培养和次代培养两个阶段。 初代培养的一般原则：
（ 1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择； （2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基； （3）最好多选 1～2 种覆盖面不同的选择性培养基； （4）尽量保证培养基新鲜；
（ 5）要考虑到微需氧菌存在的可能。
非选择培养基： 心脑浸液琼脂 （BHI）、布氏琼脂 （BR）、胰豆胨肝粉琼脂 （GAM）、胰胨酵母琼脂 （EG）、 CDC厌氧血琼脂等。
选择培养基： KVLB血平板（即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素）， 素类杆菌早期产生黑色素），七叶苷胆汁平板（
KVLB冻溶血平板（产黑
BBE，用于脆弱类杆菌）， FS培养基（梭杆菌选择培养基），
卵黄（ EYA）及兔血平板（ RBA）（用于产气荚膜梭菌）， CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）等。
分离培养
每份标本至少接种 3 个血平板，分别置于有氧，无氧及 5%～10% CO2 环境中培养，以便正确地培养出病 原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。
厌氧培养法 （1）厌氧罐培养法 （2）气袋法 （3）气体喷射法 （4）厌氧手套箱培养法
5）其他培养法
鉴定试验 1. 形态、染色
2. 菌落性状
微生物检验第十七章厌氧性细菌及检验讲义
