10种南药植物提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选模型研
究
丁运华，郭少敏，刘燕，郑建灵
【摘 要】摘要 采用筛选模型对10种南药样品乙酸乙酯提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了评价。结果表明：10种南药（益智、鸡血藤、决明子、巴戟天、溪黄草、金樱子、化橘红、佛手、绞股蓝、五指毛桃）均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。当提取物浓度为1.0 mg/mL时，溪黄草、益智、化橘红、绞股蓝、五指毛桃表现出较强的抑制活性，平均抑制率大于50%，分别为89.59%，77.10%，67.54%，52.62%，52.29%，其他5种南药的平均抑制率在20.81%～49.81%之间；提取物浓度为0.1 mg/mL时，溪黄草、益智、佛手仍表现出相对较强的抑制活性，平均抑制率大于25%，其他7种南药的平均抑制率在6.07%～24.78%之间。应该深入研究复方中药治疗老年痴呆的药效物质基础，加大对南药资源的开发利用。 【期刊名称】热带作物学报 【年(卷),期】2017(038)008 【总页数】5
【关键词】关键词 南药；乙酰胆碱酯酶；抑制活性；筛选模型 doi10.3969/j.issn.1000-2561.2017.08.013
阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s Disease，AD）又称早老性痴呆症，是一种以记忆、判断和思维等存在认知功能障碍以及人格和行为严重改变为主要特征的慢性神经退行性疾病。随着世界人口老龄化进程的加快，AD病发病率在国内外呈现不断上升的趋势，AD已成为继心脑血管疾病和癌症之后威胁老年人
生命健康的严重疾病之一。AD的发病机制复杂，目前多方面研究表明，AD患者大脑内神经递质—乙酰胆碱的缺失是导致AD疾病的关键原因[1-5]，AD的病理与患者神经间隙中乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，AChE）活性过高具有重要关系。因此乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChEI）药物是目前研究最多、使用最为广泛的抗早老性痴呆症药物[3-6]。
中国药用植物资源极其丰富，是开发乙酰胆碱酯酶抑制剂的宝库。大量研究发现，许多海藻[3]、蕨类[6]、中草药[5，7]等天然植物都有乙酰胆碱酯酶抑制活性。如药理研究表明石杉碱甲、黄皮酰胺对轻中度早老性痴呆有一定的治疗作用[3]。从天然资源中寻找AChEI一直是研究的热点领域。华南地区中草药资源蕴藏量大，用药历史悠久，疗效显著，成为中国医药学的重要流派。南药中的巴戟天、益智、化橘红、佛手、五指毛桃、溪黄草、鸡血藤、决明子、金樱子等都是华南地区常用的药用植物[8-10]。为了更好地开发利用南药资源，寻找来源于南药资源的乙酰胆碱酯酶抑制剂，本研究基于Ellman方法[11]，设计筛选模型，对10种南药（溪黄草，决明子，巴戟天，鸡血藤，金樱子，茨实，五指毛桃，绞股蓝，益智，佛手）95%乙醇提取物的乙酸乙酯组分进行活性筛选，为筛选高效安全的天然乙酰胆碱酯酶抑制剂提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 植物材料溪黄草、巴戟天、五指毛桃、绞股蓝、益智、佛手、化橘红、决明子、鸡血藤、金樱子等10种南药购于惠州同仁堂药店，经惠州学院生命科学学院林芳花副教授鉴定。
1.1.2 试剂与仪器碘化硫代乙酰胆碱（ATCI，由国药集团化学试剂有限公司进
口分装，用50mmol/L、pH8.0的PBS溶液配制），二硫代双对硝基苯甲酸（DTNB，由国药集团化学试剂有限公司进口分装，用50 mmol/L、pH7.0的PBS溶液配制），乙酰胆碱酯酶（Sigma产品，10 mg酶加入1 mg牛血清白蛋白作为稳定剂，用1 mL 50 mmol/L、pH8.0的PBS溶液溶解，制成2 U/mL的酶液），他克林（tacrine，Sigma公司，用50 mmol/L、pH8.0的PBS溶液配制），其余试剂为国产分析纯或生化试剂规格。
723E型可见分光光度计（天津科纳斯光学分析仪器有限公司），DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），RE2000A旋转蒸发仪（上海一科仪器有限公司），DK-8B型电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司） 1.2 方法
酶促反应体系（筛选模型）的建立：参照Ellman的方法稍作改进[11]。Ellman的方法是测定AChE活性最常用的方法，其原理为AChE催化水解底物碘化硫代乙酰胆碱（ATCI），水解形成的产物碘化硫代乙酰胆碱迅速与显色剂二硫代双硝基苯甲酸（DTNB）反应生成黄色产物5-巯基-2硝基苯甲酸，该产物在412nm处有光吸收。在酶催反应的稳态阶段用光吸收值OD值表征酶促反应初速度。
1.2.1 非酶促水解光吸收由于底物ATCI不稳定，在储存及水浴过程中容易发生非酶催水解产生碘化硫代乙酰胆碱，其与显色剂DTNB结合产生光吸收[11]。因此在测酶活之前，需测定ATCI非酶催水解产生的光吸收，排除背景干扰，计算真正由酶催反应所产生的光吸收值。
取pH8.0、50 mmol/L的PBS 2 730 μL于试管中，依次加入15mmol/L的DTNB100μL，15 mmol/L ATCI 100 μL，不加酶，分别于37℃水浴反应不同
10种南药植物提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选模型研究
