水产动物生理学实验指导
目 录
第一部分 水产动物生理学实验概述
一、水产动物生理学实验的目的、任务与要求 二、水产动物生理学实验报告的写作
第二部分 基本生理实验操作
第一节 组织、器官的机能实验
实验1 生理学常用仪器使用方法介绍 实验2 坐骨神经—腓肠肌标本的制备 实验3 刺激强度对骨骼肌收缩的影响 实验4 刺激频率对骨骼肌收缩的影响 实验5 蛙心起博点
实验6 期前收缩与代偿间歇 实验7 蛙心灌流 实验8 鱼类心脏灌流
实验9 离体小肠平滑肌的生理特性
实验10 反射中枢活动的某些基本特征及反射弧分析
第二节 血液组成成分及其性质的分析、血清中部分物质含量的测定
实验11 红细胞与白细胞计数 实验12 血红蛋白含量测定
实验13 血涂片制作与白细胞分类计数 实验14 红细胞沉降率的测定 实验15 红细胞比容的测定
实验16 红细胞渗透脆性的测定—浓度梯度法 实验17 蛋白质含量的测定I—双缩脲法
实验18 血清γ—球蛋白的分析测定—盐析法 实验19 血清白蛋白和球蛋白的分析测定—盐析法 实验20 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 实验21 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 实验22 糖含量的测定II—邻甲苯胺法 实验23 总脂的测定—香草醛法
实验24 胆固醇的测定—邻苯二甲醛法 实验25 血清尿素氮的测定
第三节 酶活力的分析测定
实验26 过氧化氢酶活力的测定 实验27 酸性磷酸酶活力的测定 实验28 硷性磷酸酶活力的测定
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实验29 谷丙转氨酶（GPT）活力的测定 实验30 蛋白酶活力的测定 实验31 淀粉酶活力的测定 实验32 脂肪酶活力的测定
第四节 营养、消化、吸收与代谢机能实验
实验33 耗氧率的测定
实验34 氨氮排泄率的测定
第三部分 研究设计型实验
第一节 疾病对水产动物机能影响的研究实验
参考选题
1、中国对虾（或南美白对虾）红腿病的发病机制的分析研究 2、中国对虾黑鳃病几项生理、生化、免疫指标变化的分析研究 3、鲤肠炎病几项生理、生化、免疫指标变化的分析研究 4、草鱼出血病几项生理，生化，免疫指标变化的分析研究
5、寡糖类免疫增效剂对提高中国对虾抗病力的影响及其作用机制 6、微生态制剂对提高鲤抗病能力的影响及其作用机制 7、抗生素对鲤免疫机能影响及其作用机制
第二节 环境因子对水产动物机能影响的研究实验
参考选题
1、温度对鲤（或牙鲆）生长、消化、代谢、消化酶活力及免疫力的影响 2、低温条件下鲤、鲫、鲢、鳙抗寒力的比较研究 3、氨氮、硝态氮、亚硝态氮对鲤抗病力影响的研究 4、农药对南美白对虾几项生理、生化、免疫指标的影响 5、水质净化剂对提高中国对虾免疫力的影响及其作用机制
第三节 营养和非营养因素对水产动物生长和物质利用影响的研究实验
参考选题
1、饥饿对美国红鱼的消化、代谢机能的影响 2、不同脂肪源对牙鲆生长和代谢的影响 3、美国红鱼的营养需求量的研究
4、微生态制剂饲料添加剂对促进鲤生长的影响及其作用机制 附录
常用试剂配制
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第一部分 水产动物生理学实验概述
一、水产动物生理学实验的目的、任务与要求
（一）生理实验课的目的和任务
水产动物生理学实验是水产动物生理学的配套课程，也是水产养殖专业的专业基础课，更是主要实践环节之一。本课程的主要先修课是组织胚胎学、普通动物学、生物化学实验，后续课为水产动物病理学、水产动物营养学等课实验等。
该课程不仅能强化理论课的教学，还具有独自的教育作用。培养学生实际操作能力和实验报告写作能力，培养学生提出问题、分析问题、解决问题的科学思维方法，养成实事求是、严谨求证的工作态度和规范操作、分工协作的工作作风，以及爱科学、爱公物的素养。
通过本课程学习，学生应获得以下知识和能力： 1.掌握基本生理指标测量方法；
2.掌握生理实验技能和生理手术基本操作技能； 3.了解电生理基本操作技能；
4.能独立分析实验结果、写出规范的实验报告；
5.知道生理实验设计的一般原则和方法，并作初步尝试。 6.进一步培养学生进行研究设计型实验。
水产动物生理学是一门实验学科，实验在课程学习和知能掌握中具有重要作用。水产动物生理学实验独立设课能强化学生的重视程度，有助于培养目标的落实。教程所列实验项目为学生操作或教师示范的选择内容，对不同专业可采用不同的实验对象甚至教学内容。实际行课时，课程结构中的实验概述、基本操作、综合实验和录像示教内容宜混合编排，有机组合，一次实验可安排一个或多个项目，甚至跨章的综合性内容。实验设计在课程进程中间布置、课程末尾答辩。实验课成绩评定强调全面性与全程性，包括每次实验操作和报告撰写、自行设计实验和期末考核。期末考核由口试、准备器具和操作组成。综合评定成绩不及格者必须重修本课。
（二）生理学实验方法
水产动物生理学的知识来自对生命现象的客观观察和科学实验。所谓生理学实验，就是人为地创造一定条件，以利于对平时不能从外表观察到的隐蔽或细微的生理活动能被观察，或某种生理过程能被认识。器官组织水平的生理实验方法主要分为急性和慢性两大类。急性实验法又可分为离体组织器官法和活体解剖法。如离体蛙心灌流即是离体组织器官法，如胃肠运动的直接观察即是活体解剖法。急性生理实验持续时间短暂，条件简单、容易排除其他因素干扰，并有可能对研究的对象进行直接的观察和细致的分析。动物实验后一般不能存活，也无须无菌条件。但所获得的结果可能与正常生理机能相差较大，不能轻易推断。慢性生理实验通常先实施慢性生理手术，在无菌条件下安置体内电极、安装瘘管或切除移植腺体等，待动物术后恢复时，再在机体清醒完整的情况下进行记录、取样等实验项目。这类实验过程较长，实验室条件也要求较高，实验动物模型也可使用较长时间，其机能活动更接近正常。自然，每种方法都有它的长处，也都存在—定的局限性，要了解并选择适当的方法，以与一定的研究目的和实验对象相适应。
（三）生理学实验课的要求
一堂完整的实验课包括实验前、实验和实验后三个环节。实验前应有目的地做好充分准备，仔细阅读和研究实验指导，了解实验原理和基本操作方法，复习有关的生理学知识，
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预期实验中可能出现的结果和问题。这是避免被动盲目操作、提高实验课质量的重要前提。
实验时必须遵守实验室规则，入室前穿好实验服，室内保持安静，不随意走动，不做与实验无关的事。节约实验用品，实验动物只能由教师统一发给。实验器材每次专人负责，领取清点，归还复核，损坏登记，丢失赔偿。已调试好的仪器不要任意调动，实验器具不得与其他组调换，如需要可向准备教师要求添加或更换。实验时要注意动脑思考，实验中自行更改或设计项目应征求同伴和教师意见。组内分工合作，认真有条理地操作，耐心细致地观察，及时准确地记录，原始记录交教师签字认可后方能结束实验。实验完成较早，通过教师允许可以利用动物预习下次操作、补做上次内容或自行练习等，此时仍要注意规范操作和动物福利。
实验结束后，各组清理好自己的场地、物品，归还实验用品，动物尸体放指定位置。值日同学清理好公共用品和场地，报教师同意后方可离开。每人转录、整理原始记录，及对写好实验报告上交。
特别强调要珍惜实验条件和机会，保证实验课质量；绝对不许用动物和手术器械开玩笑。有兴趣的同学可以申请参加实验准备和预备实验。
二、水产动物生理学实验报告的写作
写实验报告是对所做实验的再理解再创造的工作，是检查学生知识掌握和衡量能力的重要尺度之一，是今后撰写科学论文的初始演练。
(一)一般要求
使用学校统一印制的报告纸。填全各栏目，并标明学号或组号，“日期”一栏填做实验日期，写报告日期可标于文末。“指导教师”一栏不写，系留阅报告人签名用。报告要求格式标准、卷面整洁、图表准确、字迹端正、简明精练，按时上交。注意文字规范，语句通顺，不用自造的不规范的简化字、代号。
(二)基本格式与写法
生理实验有的侧重于操作方法(如神经-肌肉标本制备)，有的侧重于现象观察(胃肠运动的直接观察)，有的侧重于结果及分析(影响尿生成的因素)，多数则兼而有之。应根据实验类型，选用合适的报告格式及详略安排各栏目。
实验报告大体上有两种格式：一种是一般实验报告式，另一种是仿学术论文式，其对应关系如下表。一般认为操作类宜选用前者，而侧重结果的实验后者更适用。
表 实验报告的基本格式
一般实验报告式 题目(内容)
目的原理
实验对象与用品 方法步骤 结果与分析 讨论
(结论或结语) 注意事项原始记录 实验分工体会与建议
(三)注意事项
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仿学术论文式
题目
引言(导言) 材料与方法
结果与分析 讨论与结论(语)
附录(含原始记录，公式 推导，参考文献，致谢等）
写报告应以事实为根据，尽量用自己的话表述，忌抄书，不许修改、编造数据。实验方法与步骤可视重要否而详略，但报告应独立成章，不可用“见书第××页”字样而省略。有的实验报告中，结果、分析甚至实验项目可以列表表达。“讨论”是一篇报告的核心，应紧扣结果联系相关理论进行，忌就事论事或离题万里；结果也不可轻易推断或引申。“结果与分析”一栏可在实验小组内讨论，必要时也可以参考其他组数据(需注明)，但报告必须按要求独立完成，禁止互相抄袭。
第二部分 基本生理实验操作
第一节 组织、器官的机能实验
实验1 生理常用仪器设备的使用方法介绍（必修）
D－951微机化生理实验教学系统是一种智能化的四导生物信号采集分析系统，适用于80X86系列微机。具备示波器加记录仪加放大器加刺激器等传统生理仪器的全部功能。另外，还具有自动分析、参数预置、操作提示、动画释疑、中文显示、下拉菜单、鼠标驱动和在线帮助等微机特有的功能。有些实验还设计了模拟实验的内容。本系统的功能特点包括：图形化界面；Windows风格；键盘与鼠标操作兼容；模仿仪器面板式操作界面；项目化参数预置；实时记录与实验模拟并行；实时无间隙存盘（＞24h）；自动基线；项目标记；波形编辑等。硬件方面采用程控放大器（程控平衡调节）和程序刺激器，废除了传统的开关和旋钮。参数的调整，通道的切换全部由软件控制。
(1)系统结构:微机化生理实验教学系统由微机、采样及程控专用接口、程控电生物放大器、换能器接口、程控刺激器、专用软件和打印机等组成。通过记录电极或换能器引导出的生物信号，经放大后通过A/D转换送入微机处理。同时微机还可通过专用接口控制放大器的参数和状态整个系统硬件集成为两块硬卡，一块程控放大卡，一块A/D卡。
（2）基本功能：可同步记录4路生物信号。电信号2路：神经干动作电位、传导速度
测定、神经放电诱发电位、心电、脑电、肌电等。换能器信号2路：压力(血压、胸膜腔内压、中心静脉压）、张力（肌肉、肠管、蛙心、呼吸等）。
程控刺激输出：频率、波宽、幅度分别可调，可正负双向输出。 (3)操作举例：
1)血压调节：血压换能器连接到3通道，心电信号连接到1通道（可选）。选择：‘血压调节，，项目。采样周期建议为32ms，压缩比建议为1：4。连接好相应装置，用鼠标点击空格键开始记录。曲线显示的位置及幅度可通过相应的推钮进行调节。若基线位置不合适，可用鼠标点击“自动基线”按钮，使曲线回到合适的位置。所实施的实验项目可通过标功能直接标记在记录曲线上。进行刺激时，可通过面板上的按钮打开刺激器，用推钮调节刺激频率和幅度。实验结束后通过
钮左右移动图形，流浏览实验结果压（缩比可改加1：
8），并通过剪贴功能能重新编辑图形。编辑好的图形可存盘作永久保存，也可通过打印机打
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水产动物生理学实验指导
