慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞比例和IL-17表达水
平的临床意义
丁庆莉，唐古生，贺铮雯，沈 茜，秦阳华
【摘 要】摘要:目的 分析临床不同疾病程度慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常对照者外周血辅助性T细胞17(Th17)的比例和其效应分子白细胞介素17(IL-17)水平的变化与疾病严重程度、乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系，以进一步证实Th17细胞在CHB患者疾病进程中的作用。方法 应用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等检测93例CHB患者(其中轻度21例、中度37例、重度35例)和28名正常对照者外周血Th17细胞比例、血清IL-17水平，纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3、抗CD28抗体刺激后IL-17和维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)mRNA表达水平，纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平。比较和分析上述检测数据在各组间的统计学差异及与HBV DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系。结果 与正常对照组相比，CHB组外周血Th17细胞比例明显升高，且随着疾病的加重，Th17细胞的比例也随之上升。CHB重度组Th17细胞比例、IL-17和RORC mRNA表达水平显著高于中度组、轻度组和正常对照组(P＜0.05)，各组间血清IL-17水平差异无统计学意义(P＞0.05);CHB组纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平显著高于正常对照组(P＜0.05);CHB重度组培养液IL-17水平明显高于中度组和轻度组(P＜0.05)。CHB组外周血Th17细胞比例与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈明显正相关(P＜0.01)，而与血清HBV DNA载量无相关性。结论 CHB患者体内增高的Th17细胞可能是造成肝脏炎症、肝细胞损伤的主要原因之一，并与CHB的重症化密切相关。
【期刊名称】检验医学 【年(卷),期】2014(000)001 【总页数】6
【关键词】关键词:辅助性T细胞17;白细胞介素17;肝功能;慢性乙型肝炎 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染引起的乙型病毒性肝炎是我国发病率较高的疾病。在感染HBV的大部分成年人中，表现为一种急性、自限性的肝脏炎症，病毒负荷的急剧下降，长久的保护性体液和细胞免疫，但在另一部分受染的成年人和大多数经垂直传播而致病的患者中，持续的病毒感染会最终导致慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)[1]。然而 HBV 在机体持续性感染致慢性肝炎发生的病理机制尚未完全阐明。HBV是一种非细胞毒性病毒，当其进入机体后常引起一系列复杂的免疫反应，而机体产生的免疫应答的强弱又与HBV感染所致的不同临床结果密切相关。在这一系列免疫应答中，细胞免疫应答是决定HBV感染机体后转归的最重要因素。辅助性T细胞17(T helper cell 17，Th17)是近几年发现的辅助性T细胞(CD4+T细胞)新的功能亚群，主要通过分泌大量的白细胞介素17(interleukin 17，IL-17)来发挥生物学效应。目前已证实Th17细胞是急性或慢性炎症环境中重要的效应细胞，在自身免疫性疾病、炎症反应、肿瘤等的发生、发展中均发挥着重要的作用。至今，有关Th17细胞与HBV致肝脏慢性免疫性炎症关系的研究在国内外已见少量报道[2-3]，研究结果均提示Th17细胞可能在病毒性肝炎慢性化过程中具有重要作用。基于上述原因，本研究拟对临床不同疾病程度CHB患者和健康人外周血Th17细胞及其效应分子IL-17的水平进行检测，分析这些变化与患者HBV DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系，旨在进一步证实Th17细胞在CHB慢性免疫炎
症损伤过程中的作用。
材料和方法
一、研究对象
随机选取2007至2008年在长海医院感染科住院或门诊治疗的93例CHB患者，男68例，女25例，平均年龄(43±15)岁，其中轻度21例、中度37例、重度35例，诊断依据2005年修订的“慢性乙型肝炎防治指南”标准[4]。所有患者没有并发丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、人类免疫缺陷病毒感染和自身免疫性肝炎。28名健康者均为长海医院健康体检者，其中男17名，女11名，平均年龄(29±8)岁，无心、肝、肾等器质性疾病，亦无乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、人类免疫缺陷病毒感染和自身免疫性疾病。本研究经长海医院医学伦理委员会批准，每位受试对象都签署了知情同意书。 二、标本采集
采集CHB患者血液标本时，有17例接受了核苷类抗病毒治疗，11例未接受任何治疗，其余均仅接受保肝降酶治疗，均未接受甾体类药物治疗。以无菌方式采集各试验对象晨起空腹静脉血，乙二胺四乙酸抗凝血5 mL用于流式细胞仪检测细胞成分分离;不抗凝血5 mL，血清用于检测肝功能、HBV DNA、IL-17 等。
三、外周血Th17细胞和辅助性 T细胞(T helper cell 1，Th1)细胞的流式细胞仪检测
取乙二胺四乙酸抗凝血 100 μL，用 100 μL含10%小牛血清的RPMI-1640培养液(Gibco公司)混合后接种于96孔培养板(Costar公司)，同时加入终浓度为50 ng/mL的佛波醇酯(Sigma公司)、1 μg/mL离子霉素(Sigma 公司)和 1
慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞比例和IL-17表达水平的临床意义
