欧阳历创编 2021..02.09
免疫固定电泳操作规程
一． 时间：2021.02.09 创作人：欧阳历 二． 项目名称
免疫固定电泳（HYDRAGEL IMMUNOFIXATION）
三．检验方法名称
琼脂糖凝胶免疫固定电泳
四．方法学原理
血清蛋白电泳中出现的异常条带主要存在于β-球蛋白和γ-球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。
2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。
3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。
4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。
为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测
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试。经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。通过它（们）与抗血清，γ(IgG)、α(IgA)、μ(IgM)重链和κ、λ轻链（游离和非游离）反应与否进行鉴别。该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。
五．方法学溯源
自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。
六．仪器
（一） 型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210) （二） 分析和计算参数：
1． 处理量：约
18个样本/小时
2． 所需样本量：10ul 3． 检验时间：约
55分钟
4． 重复性：有良好的批内和批间重复性 5． 电泳参数：电压
0－300V（可选至3000V）
电流0－500mA
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功率0－100W
七．试剂及配套品
（一） 试剂
1． HYDRAGEL1IF
试剂盒
HYDRAGEL2IF试剂盒 HYDRAGEL4IF试剂盒 HYDRAGEL9IF试剂盒
（1） （2） （3）
商标：SEBIA
包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试 货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309
2． 脱色液
（1） 商标：SEBIA
（2） 包装规格：Pack for 10×100ml
（3） 货号：PN4540 （4） 成分：柠檬酸 3．洗涤液
（1） （2） （3） （4）
商标：SEBIA
包装规格：Pack for 10×80ml 货号：PN4541 成分：叠氮钠
4．稀释剂
（1）
商标：SEBIA
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