实验六 从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖 教学要求:
1 掌握通过等电点分离蛋白质的原理和方法; 2 掌握蛋白质鉴定的特征反应; 3 掌握还原性糖的鉴定方法。
教学重点:掌握通过调节溶液体系的pH值利用等电点分离蛋白质。 教学难点:蛋白质和还原性糖鉴定反应的操作及其现象观察 教学时数:4 学时 一、实验目的
1、掌握分离蛋白质和糖的原理和操作方法; 2、掌握蛋白质的定性鉴定方法; 3、了解乳糖的一些性质。 二、实验原理
牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质,其中,蛋白质主要是酪蛋白,而糖主要是乳糖。
蛋白质在等电点时溶解度最小,当把牛奶的PH值调到4.8时(酪蛋白的等电点),酪蛋白便沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用乙醇和乙醚来洗去其中的脂肪。 乳糖不溶于乙醇在滤去酪蛋白的清液中加入乙醇时,乳糖会结晶出来。 三、实验步骤
1、酪蛋白与乳糖的提取
4g奶粉与80 mL 40℃温水调配均匀,以10%乙酸调节pH=4.7(用精密pH试纸测试),静置冷却,抽滤。
滤饼用6mL水洗涤,滤液合并到前一滤液中。滤饼依次用6mL95%乙醇,6mL乙醚洗涤,滤液弃去。滤饼即为酪蛋白,晾干称重。 在水溶液中加入2.5g碳酸钙粉,搅拌均匀后加热至沸,过滤除去沉淀,在滤液中加入1~2粒沸石,加热浓缩至8ml左右,加入10ml 95%乙醇(注意离开火焰)和少量活性炭,搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾,趁热过滤,滤液必须澄清,加塞放置过夜,乳糖结晶析出,抽滤,用95%乙醇洗涤产品,晾干称重。 2、酪蛋白的性质
缩二脲反应 取10ml酪蛋白溶液,加入10% NaOH溶液2ml后,滴入1%CuSO4溶液1ml。振荡试管,观察现象(溶液呈蓝紫色)。
蛋黄颜色反应 取10ml酪蛋白溶液,加入浓硝酸2ml后加热,观察现象(有黄色沉淀生成)。再加入10%NaOH溶液2ml,有何变化?(沉淀为橘黄色) 3、乳糖的性质
Fehling反应 Fehling试剂A和B各3mL,混匀,加热至沸后加入0.5mL5%乳糖溶液,观察现象。
Tollen反应 在2mLTollen试剂中加入0.5mL5%乳糖溶液,在80℃中加热,观察现象(有银镜生成)。 四、实验结果 品名 性状 产量 收率
五、问题与讨论
1、本实验中是如何将蛋白质和糖分开的?
2、用乙醇和乙醚洗涤时主要除去的是哪类物质? 3、加入碳酸钙粉末有什么作用?
实验六 从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖
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