襄荷乙醇提取物的体外抗氧化活性研究
张泽生,王玉本,黄 闯,王 翠
【摘 要】目的:研究襄荷乙醇提取物(extract of Zingiber mioga Rose,EZR)的体外抗氧化作用。方法:用50%乙醇制备襄荷提取物,以VC作为阳性对照,测定EZR的总还原力及清除DPPH自由基的能力,并用荧光化学发光法测定了EZR对活性氧自由基(·、·OH、H2O2)的清除能力。结果:EZR的总还原力为40.17±1.04mg VC/g,在实验浓度范围内,对DPPH·、·OH、O-2·、H2O2的清除率分别达到了70%、64%、77%、71%。结论:EZR具有明显的体外抗氧化活性,但其抗氧化能力小于VC。 【期刊名称】食品工业科技 【年(卷),期】2010(000)012 【总页数】3
【关键词】襄荷,抗氧化活性,清除自由基,体外
襄荷(zingiber mioga Rose)又名阳荷(《黔志》)、山姜、观音花(《浙江中药资源名录》),为姜科姜属多年生草本植物,原产于中国南部,有特殊的芳香,驱虫效果明显,病虫害很少,极少使用农药,是理想的绿色食品。据李时珍《本草纲目》所载,襄荷具有活血调经,镇咳祛痰,消肿解毒,消积健胃等药用功效,是兼药理保健功能为一体的纯天然膳食纤维食品,对便秘、糖尿病等有着特殊功效。近年研究表明我国果蔬及中草药是非常有潜力的天然抗氧化资源,对果蔬抗氧化性研究更是层出不穷。襄荷作为一种绿色健康食品具有很大的开发价值。目前我国对襄荷的研究多集中在栽培、组织培养、快速繁殖和食用资源等方面,对其生物活性方面的研究甚少。本文以乙醇为溶剂从襄荷中提
取大部分生物活性物质,并对其体外抗氧化作用进行研究,以期为襄荷在营养保健及药用方面的开发应用提供理论依据。
襄荷 产自湖北十堰郧县,经鉴定为襄荷果实部分;邻苯三酚、碳酸钠、碳酸氢钠、无水硫酸铜、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、抗坏血酸等 均为分析纯;DPPH·(1.1-二苯基-2-苦肼基自由基) 购于德国Fluka公司;鲁米诺(3-Aminophthalhydrazide,98%)美国ACROS ORGANICS产品。
UV mini-1240紫外/可见分光光度计 日本岛津;荧光化学发光分析仪(Fluoroskan Ascent FL),恒温水浴锅,植物粉碎机,电子天平等。 1.2 实验方法
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2.1 襄荷醇提物的制备 将新鲜的襄荷用清水洗净,冷冻干燥后磨成细粉,用50%乙醇以1∶15的料液比在80℃浸提2h,将粗提液抽滤,50℃下减压浓缩,冷冻干燥,得到深棕色粉状物质,即襄荷醇提物,4℃保存备用。
1.2.2 总还原力的测定 标准曲线的制作:参考Lee的方法[1],将标准样品VC配制成浓度为15、37.5、75、150、300!g/mL的溶液,取1mL样液于试管中,依次加入0.2mol/L的PBS缓冲液(pH6.6)2.5mL和l%六氰合铁酸钾[K3Fe(CN)6]溶液 2.5mL,50℃水浴20min后迅速冷却,加入10%三氯乙酸(TCA)溶液2.5mL,然后以 5000r/min的转速离心 10min,取2.5mL上清液,依次加入2.5mL蒸馏水,1mL 0.1%的三氯化铁溶液,充分混匀,静置10min后,于700nm处测吸光度值,根据吸光值对VC浓度做标准曲线。 样品总还原力的测定:按以上步骤测定EZR的总还原力。结果以每克样品所含
的VC当量表示,记为mg VC/g。
1.2.3 DPPH·清除率的测定 按照文献[2]的方法测定EZR对DPPH·的清除率,以VC做阳性对照。
1.2.4 ·OH清除率的测定[3] 采用鲁米诺化学发光法测定EZR及阳性对照VC对Fenton型反应产生的·OH的清除作用。具体步骤:向发光池中依次加入2mmol/L的抗坏血酸溶液 40!L,2mmol/L的CuSO4溶液70!L,pH7.8的磷酸缓冲液50!L,不同浓度的供试液20!L,最后加入10mmol/L的鲁米诺溶液15!L,立即启动反应,记录每6s内发光强度的积分,至出现峰值(CP1),以去离子水为空白测CP0。清除率按下式计算:
1.2.5 ·清除率的测定[4] 采用邻苯三酚—鲁米诺化学发光体系测定EZR及阳性对照VC对O-2·的清除率。具体步骤:向发光池中分别加入不同浓度的供试液50!L,6mmol/L的邻苯三酚溶液100!L,再加入5mmol/L的鲁米诺溶液50!L,立刻启动反应,测定6s内的发光强度CP1,以去离子水为空白测CP0。清除率的计算同1.2.4。
注:邻苯三酚溶液是由10mmol/L的HCl溶液配制,鲁米诺溶液是用 pH=10.16,0.1mmol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液配制。
1.2.6 H2O2清除率的测定[5] 采用H2O2-鲁米诺-碳酸缓冲液(pH9.5)体系测定EZR及阳性对照VC对H2O2的清除率。具体步骤:向发光池中分别加入不同浓度的供试液50!L,pH 9.5的碳酸盐缓冲液100!L,1mmol/L鲁米诺溶液50!L,最后加入0.15%的H2O2溶液50!L,立刻启动发光反应,测定12s内的发光强度CP1,用去离子水做空白对照,测其CP0。清除率的计算同1.2.4。
襄荷乙醇提取物的体外抗氧化活性研究
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