-1992 、FDA《 细菌分析手册―需氧菌平板计数 》，或 15～300 个（如 ISO 4833 : 1991 《 微生物学 大肠杆菌菌落计数通用指南最大可能数技术》）等。
菌落计数前先观测菌落生长的情况，一般同一稀释度的平板上的菌落数应相近，不同稀释度平板上的菌落数则应与稀释倍数成反比。蔓延菌落的生长会抑制其他菌株的生长，或者会覆盖其他的小菌落，所以最好不要选择有蔓延菌落生长的平板作为计数平板，但如必须选择，应在记录中标记清楚。如片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 2 以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若只有一条链可视为一个菌落，如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。当每个稀释度制备了两块平板时，用所选择的平板的算术平均值来计算原始样品中的微生物的含量。样品的菌落数等于每克或每毫升的cfu值除以稀释度。
报告方式： 空白对照实验： 2.2大肠菌群
大肠菌群或称总大肠菌群是指一群能在37℃条件下发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。符合这些条件的肠杆菌科细菌主要包括4个菌属：
埃希氏菌属，在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种， 即大肠杆菌；
其次有柠檬酸杆菌属，其代表种有弗劳地枸橼酸杆菌； 克雷伯氏菌属，代表种为肺炎克雷伯氏菌； 肠杆菌属，代表种有阴沟杆菌和产气杆菌。 大肠菌群卫生学意义：
大肠菌群主要来源于人、畜粪便。大肠菌群是反映食品中是否存在粪便污染的指示菌，食品中有粪便污染，则可推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，同时也反映出被测食品对人体健康存在危害。大肠菌群检测已被广泛应用于食品卫生工作中。
检验的标准通常使用GB/T 4789.3-2003、SN 0168-92 检验中需了解和注意事项： 1. 挑选菌落
在实际工作中，为了提高大肠菌群的检出率，应当熟悉大肠菌群的菌落色泽和形态。在GB/T 4789.3-2003检验方法中规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽，检出率为最高；红色、粉色菌落检出率较低。
2. 发酵管的产气量
在日常工作中，有时在发酵倒管内有极微小的气泡（有时比小米粒还小），有时可遇到在初发酵时产酸未产气，但在液面及管壁却可以看到缓缓上浮的小气泡。这种情况大肠菌群的阳性检出率能达到30%-50%。所以不能忽视产气量少的，对未产气的乳糖发酵管如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能
有气体产生，而应作进一步试验。 3. 抑菌剂
大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂可抑制样品中的—些杂菌，特别是G+的生长，而有利于大肠菌群的生长和挑选。
GB/T 4789.3-2003中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，SN 0168-92中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠（月桂基）作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。
2.3金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、土壤、水、饲料、食品、灰尘及人和动物的排泄物中都可以存在。因此，食品受污染的机会很多，是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种重要细菌。由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒已成为世界性的卫生问题。
一. 生物学特性：
1. G+、需氧或兼性厌氧，通常在肉浸液肉汤及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。 2. 耐盐性强。10%-15%的氯化钠培养基中能生长。
3. 在血琼脂上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素（一种或一种以上）。多数致病菌株可产生透明溶血环，菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。
4. 葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，耐干燥可达数月，加 热 80℃ 30min 才被杀死。 5％石炭酸， 0.1%升汞 10～15 min 死亡。 l : 100000～200000 龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增 效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药菌株逐年增多。 葡萄球菌肠毒素具有耐热性，加热 100℃ 30min 不被破坏. 要使其完全破坏需煮沸2h，这是葡萄球菌肠毒素的特点 二. 毒素和酶
金黄色葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素和酶的能力。致 病性菌株产生的毒素和酶主要有下列几种：
1．血浆凝固酶：此酶由金黄色葡萄球菌产生，能使含抗凝剂的
人或兔血浆发生凝固。血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的重要标志。 2．溶血毒素：多数致病性菌株均能产生，包括 α、β、γ和 δ溶血素，对人致病主要是α-溶血素。
3．杀白细胞素：能破坏人和家兔的中性粒细胞，抵抗吞噬细胞 的吞噬 。
4. 肠毒素：分 A 、B 、C 、D 、E 和 F 六个型别。耐热， 100 ℃
30min 不被破坏。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒以 A 型为多见，其次是 B 、 C 型。 5．剥脱毒素：由噬菌体 l 群中某些金黄色葡萄球菌菌株产生。
对新生儿和免疫功能低下的成年人，可引起葡萄球菌烫伤样皮肤综合征。 三. 检验方法及鉴定
金黄色葡萄球菌检验方法主要有 GB/T4789.10-2003《食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》和SN0172-1992《出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》。
3操作步骤 3. 1增菌培养法
3. 1.1.!检样处理:按无菌操作取检样25 g(mL)，加入225 mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。
3. 1.2增菌及分离培养:吸取5 mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内，36℃士1℃培养24 h,转种血平板和Baird-Parker平板，36℃士1℃培养24 h，挑取血平板上金黄色(有时为白色)菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
3.1.3形态: 本菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径约为0.5μm--1μm
3. l. 4在肉汤中呈混浊生长，在胰酪脉大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。在Bird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2 mm---- 3 mm ,颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然
会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
3.1.5血浆凝固酶试验:吸取1，4新鲜兔血浆0. 5 mL，放入小试管中，再加人培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物o. 5 ml.，振荡摇匀，置36℃士1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h,如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。
3.2直接计数方法
3.2.1吸取上述1：10 混悬液，进行10倍递次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度稀释液1 mL，分别加入三块Baird-Parker平板，每个平板接种量分别为0. 3 mL,0. 3 mI.,0.4 mL，然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分多不易吸收，可将平板放在36℃士10C 1 h，等水分蒸发后反转平皿置36℃士1℃培养。
3.2.2在三个平板上点数周围有混浊带的黑色菌落，并从中任选五个菌落，分别接种血平板，36℃士1 0C 24 h培养后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养法。
3.2.3菌落计数:将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。
四． 鉴定试验
（1）血浆凝固酶试验：本试验是鉴定金黄色葡萄球菌致病性的重要试验．血浆凝固酶通常以兔血浆为最好，避免使用柠檬酸抗凝的血浆，以 EDTA 抗凝兔血浆为最好。取肉汤培养物0.3 mL同0.5 mL凝固
酶试验免血浆于8 mm X 100 mm试管内充分混合，置36士1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h。以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。SN0172-1992中明确规定对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等}加以证实。
( 2 ）触酶试验：挑取菌落置于清洁玻片上，滴加3%H2O2 1～2滴，1min产生大量气泡为阳性。
( 3 ）甘露醇发酵试验：多数致病性葡萄球菌菌株发酵甘露醇。 ( 4 ）耐热核酸酶试验：方法在SN0172-1992中附录C。
( 5 ) SPA 的检测： SPA 能与免抗羊红细胞血清中的 IgG 的 Fc 段结合，使致敏羊红细胞发生凝集， A 蛋白的存在是金黄色葡萄球菌的特征。
( 6 ）新生霉素敏感试验：每片含 5μg ，抑菌环＞ 16mm 者为敏感， < 16mm 者为耐药。 五．肠毒素的测定 方法在GB/T4789.10-2003中。
当食品中检出金黄色葡萄球菌时，表明食品加工处理卫生条件较差，并不一定说明该食品导致了食物中毒。但当食品中未分离出金黄色葡萄球菌时，也不能证明食品中不存在葡萄球菌肠毒素。
2.4 沙门氏菌
沙门菌属分类属肠杆菌科，是肠杆菌科中最复杂的菌属，是一种重要的肠道致病菌，可从人和世界各地所有动物中分离得到，其致病性具有种系特异性，例如人是伤寒、副伤寒 A 、B 、C 沙门菌的天
然宿主。有些专对动物致病，也有些对人和动物都能致病。沙门菌可致多种感染。 1生物学性状
形态染色 革兰阴性直杆菌，较细长，多具有周鞭毛，能运动，有时会出现无鞭毛的突变型。无芽胞，无荚膜。
1.1培养特性 兼性厌氧，最适生长温度 35 一 37℃，最适生长pH 6.8一 7.8,本菌属对营养的要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的菌落，
微生物检测方法
