2024
实验报告真核细胞rna提取的实
验报告范文_0863
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实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0863
前言语料:温馨提醒,教育,就是实现上述社会功能的最重要的一个独立出来的过程。其目的,就是把之前无数个人有价值的观察、体验、思考中的精华,以浓缩、系统化、易于理解记忆掌握的方式,传递给当下的无数个人,让个人从中获益,丰富自己的人生体验,也支撑整个社会的运作和发展。
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1.甲基绿―吡罗红染料:①染色剂A液的两种配制方法 第一种方法:取吡罗红甲基绿粉1g,加入到100mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法:取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中,取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。(注意:用于核酸染色的是吡罗红G,请不要错买吡罗红B。)
②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g,用蒸馏水溶解至1000mL备用;再取乙酸12mL,用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL,加蒸馏水50mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。
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③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现配现用。 2.TRIZOL试剂(Invitrogen公司购买) 3.75%乙醇 4.氯仿 5.异丙醇 6.Nacl(0.14m/l) (二)器材
1.离心机(3000r.p.m) 2.冰浴 3.研钵 4.烧杯 5.量筒 6.试管 7.玻棒
8.胶头滴管9 9.离心管 10.天平
以班级为单位,称取大概10g蟾蜍卵细胞(2~3℃保存),于研钵(可置于冰浴锅上)中,根据10~30mg组织细胞加1mltrizol试剂的量加入其中,快速研磨,制备匀浆。实验二人合作为一组,每组取大概10ml匀浆。
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取回匀浆后,室温静置10min,使样品充分裂解――离心(3000r.p.s)20mins――取上清液移至新的离心管――加1/5TRIZOL溶液体积氯仿――在手中反复振荡摇匀,室温静置10min。――离心20mins――取上清液――在上清中加入等体积冰冷的异丙醇,室温放置10min。――充分混匀,静置10minute――离心20min――沉淀用75%乙醇洗涤两次
取2支干净试管,一管加入1.5MLRNA溶液(将RNA颗粒状的沉淀溶于
2ML0.14/NACL溶液中),另一管加入蒸馏水1.5ML,像两管中加入3M甲基绿-吡罗红染色剂,溶液变成红色为阳性反应。
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