成纤维细胞生长因子21减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤
曹守纪，李国强*
【摘 要】［摘 要］目的：探讨成纤维细胞生长因子21（fibroblast growth factor 21，FGF21）对小鼠肝脏缺血再灌注（ischemia?reperfu?sion，IR）损伤的保护作用，并进一步研究其可能机制。方法：30只C57BL/6小鼠，随机分为3组：假手术组（sham组）小鼠仅接受开腹及关腹操作；对照组（IR+NS组）小鼠术前30 min尾静脉注射生理盐水（NS）2 mL/kg体重，制成肝脏IR损伤模型；实验组（IR+FGF21组）小鼠术前30 min尾静脉注射重组小鼠成纤维细胞生长因子21（rmFGF21）2 mL/kg体重，并制成肝脏IR损伤模型。再灌注后12 h处死小鼠，获取静脉血及肝脏组织。检测各组小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平；苏木素?伊红（HE）染色及TUNEL染色观察肝脏组织损伤情况；检测各组小鼠肝脏内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、活性氧（reactive oxyen species，ROS）含量。结果：与IR+NS组相比较，IR+FGF21组肝组织病理损伤情况明显改善，血清ALT及AST值较低（P＜0.01），肝组织MDA和ROS水平明显下降（P＜0.01），SOD和GSH含量明显上升（P＜0.01）。结论：FGF21能减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制肝缺血再灌注后的氧化应激反应有关。
【期刊名称】南京医科大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2018(038)008 【总页数】5
【关键词】［关键词］成纤维细胞生长因子21；肝脏；缺血再灌注损伤；氧化
应激
［基金项目］江苏省自然科学基金（BK20131445）；国家卫计委行业基金（2013）
［Acta Univ Med Nanjing，2018，38（08）：1049?1053］
移植物的缺血再灌注（ischemia?reperfusion，IR） 损伤是肝移植领域的重要问题，IR损伤能够促进早期及晚期移植物功能丧失［1-2］。氧化应激是IR损伤的重要机制之一，因此提高细胞的抗氧化能力、减少细胞内的活性氧簇（reactive oxyen species，ROS）能够有效减轻IR损伤［3］。成纤维细胞生长因子21（fibro?blast growth factor 21，FGF21）是一种主要由肝细胞分泌的代谢激素，能够调节机体代谢，对糖脂平衡有多种作用［4］。研究表明，FGF21能够通过上调相关基因的表达提高小鼠肝脏细胞的抗氧化能力，减轻由氧化应激导致的肝损伤［5-6］。本文拟研究FGF21对小鼠IR损伤的保护作用及其机制。
1 材料和方法
1.1 材料
健康雄性C57BL/6小鼠30只，6～8周龄，体重15～20 g（南京青龙山动物房），无特殊病原体（SPF）环境下饲养，自由进食、饮水。所有动物实验都按照NIH实验动物护理和使用指南实施。 1.2 方法
1.2.1 小鼠肝脏IR损伤模型的建立
参照 Asakawa等［7］的方法进行。术前 12 h 禁食、不禁饮。5%水合氯醛0.08 mL/10 g体重麻醉小鼠后，取中线开腹，无损伤血管夹夹闭通往肝左叶及
肝中叶（约占整个肝脏质量的70%）的肝蒂。包括门静脉、肝动脉和胆道（此时可见肝左叶及肝中叶颜色变为暗灰色）。缺血60 min后，撤离无损伤血管夹恢复血流（可见缺血肝叶颜色由暗灰色变为暗红色），开始再灌注，逐层关腹。再灌注后12 h，再次麻醉小鼠，获取下腔静脉血及肝脏左叶、中叶样本。血液样本于37℃恒温箱中静置1 h，于4℃冰箱过夜后以2 000 g离心10 min，分离并收集血清，置于-80℃冰箱中保存，用于后续检测。取部分肝脏组织，用体积分数10%福尔马林溶液固定后制备石蜡切片；另取部分肝组织迅速置入液氮中，置于-80℃冰箱中保存，用于后续检测。 1.2.2 动物分组
用随机数字表法将实验小鼠分为3组，每组10只。假手术组（sham组）小鼠仅接受开腹及关腹操作；对照组（IR+NS组）小鼠术前30 min尾静脉注射生理盐水2 mg/kg体重，按上述方法制成肝脏IR损伤模型；实验组（IR+FGF21组）小鼠术前30 min尾静脉注射重组小鼠成纤维细胞生长因子（rmFGF21）2 mg/kg体重，并制成肝脏IR损伤模型。 1.2.3 检测项目
肝脏功能的检测：采用江苏省人民医院的自动化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）含量。
肝组织病理学检测：取部分肝组织，用10%的福尔马林溶液固定，常规切片，HE染色，光镜下观察肝小叶结构变化、肝细胞坏死及水肿的情况。行TUNEL染色检测细胞凋亡情况。TUNEL染色使用购于武汉赛维尔生物科技有限公司的TUNEL染色试剂盒按说明进行。操作步骤为：①用免疫染色固定液4%多聚甲醛固定细胞30～60 min；②PBS洗涤2次，每次10 min；③加入免疫染色强
成纤维细胞生长因子21减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤
