ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料:
(一)单克隆抗A、抗B试剂(由试剂厂家提供) (二)显微镜、载玻片
(三)A型、B型红细胞(本实验室制备的5%混悬液) (四)EDTA抗凝的待测红细胞全血 (五)竹签
二、方法(玻片法):
(一)正定型:
1. 在一块干净的玻片上,间隔一定距离做好标记,分别滴一滴抗A和抗B试剂; 2. 在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血;
3. 用竹签混匀试剂和红细胞,并使混合物直径>15mm; 4. 轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察; 5. 判读、解释并记录反应结果。 (二)反定型:
1. 在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴;
2. 在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴; 3. 混匀(同正定型);
4. 轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察; 5. 判读、解释并记录反应结果。
6. 结合正反定型反应结果、判定血型,见表1
表1ABO血型正反定型试验结果判定
正定型 反定型 血型 抗体试剂+红细胞标本 抗A + O O + 三、附注: 红细胞试剂+血清标本 A细胞 O + + O B细胞 + O + O A B O AB 抗B O + O + (一)表中“O”表示无凝集,“+”表示凝集,一般都是3-4个+的强凝集反应; (二)2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应;
(三)若得到弱的或可凝集反应结果,该标本应用试管法重新试验;
(四)由于新生儿在出生4~6个月内,血浆中的ABO抗体活动太弱,并且含有来自母亲的抗体,故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型; (五)做正定型时,还可加一抗A、B血清(O型人血清),以检测ABO弱抗原;做反定型时可以加试一O型红细胞,借以证实是否有不规则抗体的存在。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
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