临床免疫学检验
1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能
2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；
外周免疫器官：淋巴结、
脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织
4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg
EB病毒受体和小鼠红细胞受体。
表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、
成熟B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD）同时检测CD5分子，可分为B1细胞和B2细胞。B细胞功能检测方法：
溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。
CD4；杀伤T细
5、T细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是CD3（多链糖蛋白）；辅助T细胞的标志是胞的标志是CD8；T细胞受体=TCR。T细胞和NK细胞的共同表面标志是
CD2（绵羊红细胞受体）；
CD3＋CD4＋CD8－ = 辅助性T细胞（Th）
CD3＋CD4－CD8＋ = 细胞毒性T细胞（Tc或CTL）（T细胞介导的细胞毒试验）CD4＋CD25＋ = 调节性T细胞（Tr或Treg）
T细胞功能检测：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T细胞增殖。增殖试验有：形态法、核素法。T细胞亚群的分离：
亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法
*E花环试验是通过检测SRBC受体而对T细胞进行计数的一种试验；
6、NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞）表面标志：CD16（ADCC）、CD56。测定人NK细胞活性的靶细胞多用
K562细胞株，而测定小鼠
NK细胞活性则常采用
YAC-1细胞株。
7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统（MPS，表面标志CD14，包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。8、人成熟树突状细胞
（表达MHCⅡ类分子）
表面标志为CD1a、CD11c和CD83。
抗体功能）及膜型（mIg，作为抗原受体
（DC）（专职抗原呈递功能）：
9、免疫球蛋白可分为分泌型（sIg，主要存在于体液中，具有表达于B细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白）
10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序）免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上
恒定区（CH、CL）
VH和VL（高变区）是抗原结合部位。
IgG1最高），血液和细胞外液中的主要抗体。也是
IgG为主。
再次免疫
13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白（敏Ⅱ型抗体是
应答的主要抗体，是唯一能通过胎盘的抗体，大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是
IgG，免疫学检测中第二抗体也以
IgG，某些自身抗体及超
14、IgA：分血清型（单体存在）及分泌型；分泌型道、支气管分泌液、
IgA（sIgA）为二聚体，性能稳定，主要存在于胃肠
黏膜局部免疫的主要抗体。
最早合成
初乳、唾液、泪液中，局部浓度高，是参与
15、IgM：为五聚体，主要存在于血液中，是和分泌的抗体。抗原刺激后体液免疫应答中
Ig中分子量最大的（又称巨球蛋白）。个体发育最先产生的抗体，感染过程中血清
IgM水平升高，说明近期
感染。新生儿脐血中若IgM增高，提示有宫内感染。16、IgE：为单体结构，正常人血清中应和寄生虫早期感染患者血清中可升高。
17、补体：具有酶样活性的球蛋白（肝细胞、巨噬细胞产生）；激活途径主要有三种：经典途径（以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要激活剂（双链细胞壁成分（脂多糖）直接激活补体生的甘露糖结合凝集素（18、补体系统中19、灭活：加热
DNA），C1～C9全部参与）、替代途径（病原微生物
C3，然后完成C5～C9的激活过程）、MBL途径（由急性炎症期产含量最低。IgE为亲细胞抗体，介导
Ⅰ型超敏反应。特异性过敏反
MBL）与病原体结合后启动激活）。
C3含量最多，C2含量最少。56℃30分钟，补体丧失活性
20、补体清除免疫复合物的方式：吞噬调理；免疫粘附；免疫复合物抑制。21、完全抗原=反应原性+免疫原性。半抗原=反应原性（无免疫原性）22、抗原抗体结合力（分子间引力）：静电吸引、范德华力、氢键、
疏水作用力（最强）
pH、电解质、
23、抗原抗体反应的四大特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性；受反应条件（如温度、抗原抗体比例等）的影响。
24、抗体过量——前带；抗原过量——后带（钩状效应）25、抗原抗体反应可分为两个阶段：需几秒至几分钟，但小时。
第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅
不出现可见反应；第二阶段为可见反应阶段，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数
26、颗粒性抗原出现凝集反应。可溶性抗原出现沉淀反应。单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。27、木瓜酶水解IgG为2Fab+Fc；胃蛋白酶水解IgG为F(ab)2+nFc。
28、最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种。
29、R（兔子）型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体，抗原抗体反应比例合适作诊断试剂。
H（马）型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较疗。
30、抗血清常见保存条件：
2-8℃保存；冷冻保存（最常用）；真空干燥保存（
5-10年）。
立即浸
窄，一般用作免疫治
范围较宽，适于
31、杂交瘤细胞放入液氮（-196℃）前，需要逐步降温。复苏细胞时，从液氮罐内取出冻存管，入37℃水浴。
32、凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。33、直接凝集反应：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的直接与相应抗体结合出现凝集。抗原
=凝集原，抗体=凝集素。
电解质（0.85%氯化钠）参与下可
34、玻片凝集试验：主要用于抗原的定性分析，AB0血型的测定。
试管凝集试验：肥达氏试验、外斐试验、输血交叉配血试验；
35、正向间接血凝反应（PHA）：红细胞包被抗原，用以检测抗体。（凝集）
反向间接血凝反应（RPHA）：红细胞包被抗体，用以检测抗原。（凝集）36、间接血凝抑制试验：37、金黄色葡萄球菌
可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。（
不凝集）
A蛋白（SPA）--协同凝集反应(反向间接凝集)
O型人红细胞）可在微量滴定板或试管中进行，将标
集中呈一圆点的
38、血凝试验（载体为绵羊、家兔、鸡的红细胞及本倍比稀释，一般为
为不凝集。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。39、胶乳凝集试验（间接凝集），所用载体为
1:64，同时设不含标本的稀释液为对照孔。凡红细胞沉积于孔底，
聚苯乙烯胶乳；明胶凝集试验（间接）将病毒抗原或重组
抗原吸附于粉红色明胶颗粒：HIV-1抗体和抗精子抗体检测
40、抗球蛋白试验，又称Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。包括直接Coombs试验（检测红细胞上的不完全抗体）和41、沉淀反应分两个阶段：淀线、沉淀环。
絮状沉淀试验：抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此
常用来作为测定抗原抗体反应最适比例
的方法。
间接Coombs试验（游离在血清中的不完全抗体）
第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性
小的复合物，肉眼不可见。第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉
42、免疫比浊：最适pH为6.5～8.5，磷酸盐缓冲液。（R型抗体，增浊剂如聚乙二醇（PEG）、吐温-20）。适合于大批量标本的检测。
当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。
当抗原过量时，形成的IC（免疫复合物）分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。
43、单向扩散试验是在琼脂内混入抗体，
测抗原。
48小时）的结果，沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线
Mancini曲线适用大分子抗原和长时间扩散（＞性关系。
Fahey曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理，线性关系。
双向扩散试验是对抗原或抗体进行定性分析。沉淀线如果靠近抗原孔，则表示抗体含量较大沉淀线如果靠近抗体孔，则表示抗原含量较大。不出现沉淀线则表明无对应的抗体或抗原*分子量小者扩散快，反之则较慢。
或者抗原过量。
用半对数值画线，浓度对数与扩散环直径呈
由于慢者扩散圈小，局部浓度则较大，形成的沉淀线弯向分子量大的一方。
如果两者分子量大致相等，则形成直线。*两条沉淀线互相吻合相连
，表明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀，两个
抗原相同
沉淀线呈部分相切，说明两个抗原之间有部分相同。两条沉淀线交叉而过，说明两个抗原完全不同。*出现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价。*出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯。出现多条沉淀线说明不纯。
44、对流免疫电泳（双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术）：抗体流向负极，抗原流向正极；最适比例出现沉淀线。
火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术，体混合于琼脂中，样品孔中的抗原置于负极端，电泳时抗体箭的不溶性复合物沉淀峰。）免疫电泳技术：区带电泳免疫固定电泳：电泳
实质上是加速的单向扩散试验。（抗
不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量的逐
。
渐减少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火
顶部呈不清晰的云雾状或圆形，则表示未达终点
用于纯化抗原和抗体成分的分析
（M蛋白的鉴定与分型，
）。
限量抗体），反比关RIA快，灵敏度明显高
也用予尿液中本
+免疫双向扩散。
+沉淀反应技术，可用于各种蛋白质的鉴定
-周蛋白的检测及κ、λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型。
45、RIA（放免）核素（125Ⅰ）标记抗原，竞争抑制（标记抗原和非标记抗原竞争系；IRMA（免疫放射）核素标记抗体，非竞争结合（过量标记抗体，反应速率比于RIA），正比关系。
*RIA可以测定大分子和小分子抗原，但46、常用的荧光素有：橙红色；藻红蛋白（
IRMA则只能测定至少有两个抗原决定簇的抗原
。
异硫氰酸（FITC，最大吸收光波长R-RE）橙色。其他：铕（
Eu3＋）
490～495nm）黄绿色，最常用；四乙基罗丹明
（TRITC，最大吸引光波长为
550nm）
（RB200，最大吸收光波长为570nm）橘红色；四甲基异硫氰酸罗丹明
47、荧光标记蛋白的常用方法：搅拌法和透析法。荧光抗体效价鉴定：抗原含量为
1g／L时，抗体效价＞1：16
48、时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）以镧系元素（如：铕）化合物为荧光标记物。49、偏振免疫测定的偏振波长是
485nm（蓝光）。不适宜测定大分子物质。
50、荧光酶免疫：由于使用酶和荧光底物的化学反应作为放大系统，故灵敏度大大提高。51、均相法：不分离，直接测（用于小分子激素和半抗原最早用于临床。酶标半抗原。
EIA：异相法：先分离，后测定。固相酶免疫测定（如52、酶联免疫吸附试验（
ELISA）：
ELISA中应用最广
ELISA）
（如药物）的测定）；酶放大免疫测定技术（EMIT）
辣根过氧化物酶（HRP）：底物（1）邻苯二胺（OPD），（2）四甲基联苯胺（TMB）泛的底物。（HRP标记抗体或抗原的最常用方法——改良过碘酸钠法）碱性磷酸酶（ALP）：底物：对-硝基苯磷酸脂（p-NPP）
β-半乳糖苷酶（β-Gal）：底物：4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU）必要的试剂：①固相的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶反应的底物。抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是使用竞争抑制法。
抗体测定：通常使用间接法(HCV、HIV)、双抗原夹心法（HBsAb）、竞争法（HBcAb、HBeAb）和捕获法（IgM）等*待测孔最后显示的间接法测抗体；
*封闭：1%～5%的牛血清白蛋白或
5%～20%小牛血清。
HRP）鲁米
颜色深浅与标本中的待测抗原或抗体呈
正相关的是：双抗体夹心法、双位点一步法、
双抗体夹心法（HBsAg）。只有单个抗原决定簇的小分子，则
53、化学发光底物有：直接化学发光剂：吖啶酯和三联吡啶钌；酶促反应发光剂：（标记酶诺及其衍生物、（标记酶为碱性磷酸酶）54、免疫印迹实验中常选用多克隆抗体。55、外周血单个核细胞的分离的分层液常用：
AMPPD；
Ficoll（由上到下为血浆，单个核细胞，粒，红）和Percoll
（由上至下：死细胞，单个核细胞，淋，红，粒）。
56、纯淋巴细胞群的采集有：黏附贴壁法，吸附柱过滤法，磁铁吸引法，57、T细胞和B细胞的分离：E花环沉降法，尼龙毛柱分离法58、淋巴细胞活力测定：台盼蓝染色法，死细胞为蓝色。59、CD4是HIV受体，HIV感染时CD4／CD8比值明显降低。
60、CD4／CD8升高常见于自身免疫性疾病；而CD4／CD8降低常见于病毒感染、恶性肿瘤和再生障碍性贫血等。
61、（ELISA）双抗体夹心法是用于
细胞因子测定的最常用方法。
Percoll
分离液法。
62、流式细胞仪：前向散射光（FS）反映颗粒的大小。侧向散射光（SS）反映颗粒内部结构复杂程度、表面的光滑程度。荧光（
FL）反映颗粒被染上荧光部分数量的多少。
FITC）亮绿色荧光。德州红红色荧光。藻胆蛋
63、免疫荧光标记最常用的荧光染料：异硫氰酸荧光素（白类橙色至红色荧光。
64、临床上常用三色荧光抗体标记将
CD3-CD16+CD56+淋巴细胞确定为NK细胞。
T细胞亚群CD4Th／CD8Tc比例
NK细胞减少或
65、AIDS患者的一个特征性免疫诊断指标表现为：活力下降，B淋巴细胞群则处于正常范围。65、强直性脊柱炎——
HLA-B27
T淋巴细胞总数减少，
倒置，Th／Tc＜1.0，Th细胞数量显著下降甚至测不出，而Tc细胞数量可正常或增加，
66、SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以67、M蛋白（MP）是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖（＞序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白。多无免疫活性，故又称高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白区带电泳技术
IgM增高为主。
30g／L）所产生的一种在氨基酸组成及顺副蛋白。临床上多见于多发性骨髓瘤、
临床免疫学检验知识点
