SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤(总4
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实
验原理和操作步骤
实验原理：
SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。
SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。
试剂和器材：
试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）: 1mol/L的Tris-HCl,5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。
2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
3. 分离胶缓冲液： Tris ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调，定容至100ml， 4℃保存。
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4. 浓缩胶缓冲液： Tris ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调，定容至100ml， 4℃保存。 5. TEMED（四乙基乙二胺）原液 %过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）
7. Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris ，甘氨酸，加蒸馏水约900ml，调后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。 器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。
实验操作 （一）样品制备
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理和操作步骤
