本技术提供了一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，通过以海藻酸钠为基本载体，配合壳聚糖、明胶、甘油、大米、泥炭、煤渣、麦芽根多种填充物混合得到混合物，混合物灭菌后，将菌剂包埋到混合物中得到菌剂混合物，将菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到氯化钙溶液中制成球状物，在球状物固化清理后得到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。在本技术中，内球囊霉真菌的孢子、菌根及菌丝包埋在海藻酸钠中，播种在未灭菌的土壤中时可以完成完整的侵染过程，随侵染时间的延长，侵染率均有提升。本技术的制备方法简单、成本低廉、毒性小，本技术的丛枝菌根真菌胶囊菌剂包埋材料易于被微生物分解，保存时间较长，同时可直接播种于大田中。
技术要求
1.一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）以海藻酸钠为基本载体，往所述基本载体中加入填充物混合，将所述 混合物灭菌，并将丛枝菌根液体菌剂均匀包埋到所述混合物中，得到菌剂混合 物；其中，所述填充物为壳聚糖、明胶、甘油、泥炭、煤渣、麦芽根和大米粉 其中至少一种；所述菌剂混合物中海藻酸钠、填充物以及丛枝菌根的质量百分 比分别为2～3%、2～9%以及1～2%；
（2）将所述菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到质量浓度为1.5～4.5%氯 化钙溶液中，在搅拌状态下，所述菌剂混合物的滴入物在氯化钙溶液中形成球 状物，在所述球状物固化后取出，并将表面氯化钙用无菌水清洗后晾干，得到 丛枝菌根真菌胶囊菌剂。
2.如权利要求1所述的丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征在于，
在步骤（1）中，所述填充物为占菌剂混合物质量百分比值为2%的壳聚糖、3% 的明胶、5%的甘油、3～5%的泥炭、7～9%的煤渣、2～5%的麦芽根或2～5%的大 米粉。
3.如权利要求1所述的所述的丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征
在于，在步骤（1）中，所述填充物在使用前研磨均匀；
在步骤（1）中，所述液体菌剂与灭菌后混合物的温度均低于40℃，所述 灭菌为在121℃、0.12MPa压力下蒸汽灭菌20min； 在步骤（1）中，所述包埋的温度为20～40℃。
4.如权利要求3所述的丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征在于，
在步骤（1）中，丛枝菌根液体菌剂通过以下步骤制备：
A、将丛枝菌根用胡萝卜离体根进行双重培养，获得丛枝菌根真菌培养物； B、将所述丛枝菌根真菌培养物搅碎后，过400目筛并用无菌水筛除杂质，
留取含有菌丝、孢子及菌根的丛枝菌根液体菌剂。
5.如权利要求4所述的丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征在于，
所述丛枝菌根为根内球囊霉菌（Glomusintraradices）。
6.如权利要求5所述的丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，其特征在于，
在步骤（2）中，所述物理挤压方式为将所述菌剂混合物用恒流泵或注射器进行 挤压；
在步骤（2）中，所述球状物的直径为3～6mm； 在步骤（2）中，所述搅拌的速度不大于30rpm/min； 在步骤（2）中，所述固化的时间为8～16h。 说明书
一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法技术领域
本技术属于胶囊菌剂制备技术领域，尤其涉及一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂 的制备方法。 背景技术
丛枝菌根（Arbuscularmycorrhizalfungus，丛枝菌根真菌）真菌是广泛存 在于土壤中的内生菌根真菌，它可以与地球上80%的植物形成共生体系。研究 表明，丛枝菌根真菌可以改善植物体内水分代谢，提高抗干旱、盐碱能力；增 强植物抗病能力；促进植物对各种矿质元素的吸收与利用，从而促进生长，改 善品质。而丛枝菌根真菌则利用宿主植物提供的碳水化合物维持自身生长和繁 殖。丛枝菌根真菌是专性共生真菌，自身不能合成DNA，因此至今还无法像外 生真菌一样进行纯培养进而工业发酵，只能依存植物根部与其共同繁殖生长。 液体菌剂生产简单，成本低廉，使用方便，但是运输困难，不利于真菌的 生长和繁殖，储存时间不宜过长。固体菌剂是在液体菌剂基础上，加入适当物 质和菌种生产而成，制作简单，运输及储存方便，缺点是同等质量和体积的菌 剂含菌量低于液体菌剂。粉剂是将孢子混入填充料中制成的菌剂，储存、运输 及使用较为方便，但菌剂中只有孢子，孢子发芽不好会影响菌剂的使用效果。 技术内容
本技术的目的在于提供一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，旨在解决 的问题。
本技术是这样实现的，一种丛枝菌根真菌胶囊菌剂的制备方法，包括以下 步骤：
（1）以海藻酸钠为基本载体，往所述基本载体中加入填充物混合，将所述 混合物灭菌，并将丛枝菌根液体菌剂均匀包埋到所述混合物中，得到菌剂混合 物；其中，所述填充物为壳聚糖、明胶、甘油、泥炭、煤渣、麦芽根和大米粉 其中至少一种；所述菌剂混合物中海藻酸钠、填充物以及丛枝菌根的质量百分 比分别为2～3%、2～9%以及1～2%；
（2）将所述菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到质量浓度比为1.5～4.5% 氯化钙溶液中，在搅拌状态下，所述菌剂混合物的滴入物在氯化钙溶液中形成 球状物，在所述球状物固化后取出，并将表面氯化钙用无菌水清洗后晾干，得 到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。
优选地，在步骤（1）中，所述填充物为占菌剂混合物质量百分比值为2% 的壳聚糖、3%的明胶、5%的甘油、3～5%的泥炭、7～9%的煤渣、2～5%的麦芽 根或2～5%的大米粉。
优选地，在步骤（1）中，所述填充物在使用前研磨均匀；
在步骤（1）中，所述液体菌剂与灭菌后混合物的温度均低于40℃，所述 灭菌为在121℃、0.12MPa压力下蒸汽灭菌20min； 在步骤（1）中，所述包埋的温度为20～40℃。
优选地，在步骤（1）中，丛枝菌根液体菌剂通过以下步骤制备：
A、将丛枝菌根用胡萝卜离体根进行双重培养，获得丛枝菌根真菌培养物； B、将所述丛枝菌根真菌培养物搅碎后，过400目筛并用无菌水筛除杂质，
留取含有菌丝、孢子及菌根的丛枝菌根液体菌剂。
优选地，所述丛枝菌根为根内球囊霉菌（Glomusintraradices）。
优选地，在步骤（2）中，所述物理挤压方式为将所述菌剂混合物用恒流泵 或注射器进行挤压；
在步骤（2）中，所述球状物的直径为3～6mm； 在步骤（2）中，所述搅拌的速度不大于30rpm/min； 在步骤（2）中，所述固化的时间为8～16h。
为克服现有技术的不足和缺点，在本技术中提供了一种丛枝菌根真菌胶囊 菌剂的制备方法，通过以海藻酸钠为基本载体，配合壳聚糖、明胶、甘油、大 米、泥炭、煤渣、麦芽根多种填充物混合得到混合物，混合物灭菌后，将菌剂 包埋到混合物中得到菌剂混合物，将菌剂混合物通过物理挤压方式滴入到氯化 钙溶液中制成球状物，在球状物固化清理后得到丛枝菌根真菌胶囊菌剂。在本 技术中，内球囊霉真菌的孢子、菌根及菌丝包埋在海藻酸钠中，播种在未灭菌 的土壤中时可以完成完整的侵染过程，随侵染时间的延长，侵染率均有提升。 本技术的制备方法简单、成本低廉、毒性小，本技术的丛枝菌根真菌胶囊菌剂 包埋材料易于被微生物分解，保存时间较长，同时可直接播种于大田中。 附图说明
图1是本技术效果实施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂1～8的外形观察结果图； 图2是本技术效果实施例中不同菌剂25天后的侵染率的结果比较图； 图3是本技术效果实施例中不同菌剂随着培养时间下侵染率变化示意图； 图4是本技术效果实施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂5储存不同时间后对高 粱的侵染率变化示意图；
图5是本技术效果实施例中丛枝菌根真菌胶囊菌剂1、2以及4冷冻干燥前 后侵染率变化示意图。 具体实施方式
为了使本技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实 施例，对本技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅 仅用以解释本技术，并不用于限定本技术。
实施例丛枝菌根真菌胶囊菌剂的生产 （1）液体菌剂的制备
取Ri-TDNA胡萝卜根双重培养获得的根内球囊霉菌（Glomusintraradices） 固体菌剂（该菌剂的具体制备方法参见公开号CN101565689A名为：“丛枝 菌根真菌孢子的高密度纯种生产方法”的技术专利），放入搅碎机中加入少量 水搅碎，取出后在400目的筛子中以无菌水反复筛洗，去除琼脂培养基，保留 下的即为浓度为（3～6）×102CFU/ml的丛枝菌根真菌液体菌剂，含有高侵染的 菌根、孢子及菌丝。 （2）基本载体和填充物的制备
将基本载体为海藻酸钠和填充物混合均匀，其中，基本载体与填充物的质 量比为2-3：2～9，填充物的种类和用量如表1所示，混合后加水定容至200ml， 将混合物在121℃、0.12MPa的高压灭菌锅中进行灭菌处理20min，冷却到低于
40℃，备用。
（3）胶囊菌剂的制备
无菌条件下将丛枝菌根真菌液体菌剂50ml（500个孢子/ml）在20～40℃下 包埋到步骤（2）中灭混后的混合物中，混合均匀，制成菌剂混合物。 （4）以注射器或是恒流泵将所述菌剂混合物匀速滴入到质量浓度为
1.5～4.5%无菌氯化钙溶液500ml中，用磁力搅拌器以低于30rpm/min转速搅拌，
所述菌剂混合物的滴入物在氯化钙溶液中形成直径为3～6mm球状物，在所述 球状物固化8～16h后取出，并将表面氯化钙用无菌水清洗后晾干，得到丛枝菌 根真菌胶囊菌剂。
在本技术实施例步骤（2）中，所用填充物、用量及其对应制备的丛枝菌根 真菌胶囊菌剂如下表1所示：
效果实施例丛枝菌根真菌胶囊菌剂的外形观察以及侵染活性的检测
1、丛枝菌根真菌胶囊菌剂1～8的外形观察
丛枝菌根真菌胶囊菌剂的设备制作方法与相关技术
