嘌呤霉素盐酸盐具体使用方法及步骤

嘌呤霉素盐酸盐具体使用方法及步骤

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖 苷类抗生素，扰乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟链终止来抑制蛋白质合成，从而杀死 革兰氏阳性菌及各类动物和昆虫细胞。 嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体 多数都携带pac 基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac 基因质粒的大肠 杆菌菌株。链霉菌中的嘌呤霉素 N-乙酰转移酶基因（pac）可使机体对嘌呤霉素耐药。嘌呤霉素作 用迅速，在低浓度下即可快速导致细胞死亡。

嘌呤霉素盐酸盐用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢 率而变化，推荐使用浓度为0.1-10μg/ml。对于第一次使用的实验体系建议通过预实验筛选出最小致死浓度。

3. 预实验步骤

1） 第一天：未转化的细胞按照 50-70%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2 孵育 过夜；

2） 根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞，可设定 0、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0、2.5μg/ml 等。根据储存液的浓度 1μg/μl 对应稀释设定的 终浓度；

3） 维持 puromycin 浓度，隔天换液，观察。连续 4 天，选择能将细胞完全杀死的最适 puromycin 浓度。