γ辐照降解肉制品中克伦特罗的初步研究
杨郡亭1,2,冯 敏1,赵永富1,2,季 萍1,2,石 岩1,2,李俐俐1,2,唐玉新1
【摘 要】摘要：采用酶联免疫法(ELISA)检测肉制品中瘦肉精——克伦特罗γ射线辐照降解效应,结果表明：辐照可以显著降低肉制品中克伦特罗含量,降解率随辐照剂量增大而提高,当辐照剂量为 3.4 kGy时,肉制品中克伦特罗的降解率在 80%以上。
【期刊名称】江苏农业科学 【年(卷),期】2010(000)006 【总页数】3
【关键词】克伦特罗;降解
克伦特罗(clenbuterol)化学名为 4-氨基 -(叔丁胺甲基)-3,5-二氯苯甲醇,是一种儿茶酚胺衍生合成的化合物。它最早作为止喘药用于防治哮喘和支气管痉挛。因其对动物具有明显促进生长、增加瘦肉率、减少脂肪含量、改善生产性能等作用,曾被加在饲料中用于饲养猪,又称为瘦肉精。含有“瘦肉精”的猪肉如果被人食用后,会产生心悸、面颈、四肢肌肉颤动、心律失常等副作用,严重影响人类的健康。早在20世纪 80年代初,美国药品食品管理局(FDA)和世界卫生组织(WHO)就建议肉脂肪中克伦特罗最高残留限量为2μg/kg[1]。我国 1997年已经明令禁止畜牧业生产、销售和使用克伦特罗,但全国各地克伦特罗中毒事件仍频繁发生,仅2001年至 2006年 9月确定为“瘦肉精”引起的中毒事件粗略统计就达 17起,共引起 2141人中毒。辐照技术在杀灭肉制品中寄生虫和病原物、降低微生物负载水平、保证肉制品卫生质量安全方面正被广泛应用[3]。近年来,辐照食品科技工作者开始关注辐照引发食品中的有毒有机物降解问题,其中氯霉
素、生物毒素的辐照降解研究较多,但有关克伦特罗辐照降解效果的研究还很少[4-5]。为了确保食品质量和辐照食品安全,本试验采用60 Co-γ射线辐照含有克伦特罗的肉制品及水溶液,并用酶联免疫和液相色谱 2种方法分析其降解特性。
1 材料与方法
1.1 样品制备
试剂：盐酸克伦特罗 (clenbuterol hydrochloride,纯度≥99.1%,北京精达科锐实验用品有限责任公司)和克伦特罗检测试剂盒[酶联免疫法(ELISA),大连普瑞康生物技术有限公司]。
含克伦特罗的肉制品制备：从超市购入小包装熟肉制品5袋(180 g/袋),用榨汁机打碎,加入克伦特罗标准品溶液使肉制品中克伦特罗含量为 2mg/kg,捣碎、搅拌、混匀,再分装成每袋 50 g,共 15袋。辐照后用酶联免疫法检测克伦特罗含量。 1.2 辐照处理
辐照在南京辐照中心源强为 7.4×1014 Bq的 II号60 Co-γ辐照装置上进行。根据预定的吸收剂量将样品置于源室的不同位置辐照 ,辐照剂量设定为 0、0.5、1、2、3、6 kGy,用 Ag2 Cr2 O7剂量计跟踪测定样品实际吸收剂量值。 1.3 检测
1.3.1 酶联免疫法 用美国热电 3AWA0416型酶标分析仪,参照 GB/T 5009.192—2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》中酶联免疫法(ELISA筛选法)的操作步骤,进行克伦特罗标准溶液和试样检测。
1.3.2 高效液相色谱法 Agilent C18高效液相色谱仪。色谱条件：色谱柱 XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相：甲醇 +水(45+55);流速 ：0.8 mL/m in;柱箱温度 ：25 ℃;紫外检测器 ：244 nm;进样量 ：20 μL。
2 结果与分析
2.1 肉制品中克伦特罗的辐照降解
2.1.1 克伦特罗酶联免疫测定标准曲线 用酶联免疫试剂盒在 450 nm处测定克伦特罗标准溶液系列的吸光度。将测得的吸光度值除以空白溶液的吸光度得出相对百分吸光度值：B/B0×100%。绘制相对百分吸光度值(%)与克伦特罗浓度(μg/L)的自然对数关系曲线(图 1)。通过对相对百分吸光度值(y)与克伦特罗浓度的自然对数(x,lnC)进行线性回归分析,得到回归方程：y=-11.14x+23.83(r=0.9919),这表明克伦特罗浓度的自然对数与相对百分吸光度在 0.1～4.0μg/L范围内呈显著线性相关关系。
2.1.2 回收率试验 以浓度为20.0mg/kg的 3个加标样品考察肉制品中克伦特罗提取回收率,结果见表 1。其本底值为 1.2μg/kg,低于肉制品中残留克伦特罗限量 2μg/kg的要求;克伦特罗添加回收率平均为87.43%,相对标准偏差为0.66%。
2.1.3 肉制品中克伦特罗辐照降解效果 由表 2可见,随着辐照剂量的增大,肉制品中克伦特罗含量逐渐降低。当辐照剂量为 1.0 kGy时,肉制品中克伦特罗降解率达 43.6%。随着辐照剂量增大到3.4 kGy时,克伦特罗降解率超过80%;但继续增大辐照剂量,降解效果未相应提高。 2.2 水溶液中克伦特罗的辐照降解
为确认肉制品中克伦特罗的辐照降解效应,进行了克伦特罗水溶液辐照降解研究。高效液相色谱测定表明(图 2)：未辐照克伦特罗水溶液皆在 8 min处出现克伦特罗色谱峰,且峰面积随着浓度的增加 (5、10、40μg/L)成比例增加;经3 kGy辐照后,各浓度克伦特罗色谱峰消失。这说明辐照确实降解了水溶液中的克伦特
γ辐照降解肉制品中克伦特罗的初步研究
