百部总生物碱缓释片的质量标准研究△
吴旖1,2*，赵斌1,2*，江仁望3
【摘 要】[摘要] 目的：建立百部总生物碱缓释片的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对百部总生物碱缓释片中对叶百部碱进行定性鉴别，采用固相萃取-高效液相-蒸发光检测法建立百部总生物碱缓释片中对叶百部碱的含量测定方法，并测定其体外释放度。采用蒸发光散射检测器，色谱柱为Agilent Zorbax Extend-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.12%三乙胺溶液(40∶60)；流速为1.0 mL·min-1；柱温为25 ℃；进样量为30 μL；ELSD参数为漂移管温度97 ℃、空气流速为3 mL·min-1。结果：本品定性鉴别薄层色谱特征明显，专属性强。对叶百部碱的质量浓度为0.02～0.30 mg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.86%，百部总生物碱缓释片在2、8、12 h的累积释放度分别为10%～30%、50%～70%、80%～100%，均符合规定。结论：该分析方法简单、快速、准确、具有代表性，可作为百部总生物碱缓释片的质量控制方法。 【期刊名称】中国现代中药 【年(卷),期】2016(018)004 【总页数】4
【关键词】[关键词] 百部；总生物碱；缓释片；高效液相色谱法；体外释放度 ·中药工业·
百部是一味具有镇咳活性的传统中药，始载于公元500年左右陶景洪编纂的《名医别录》。现在，百部仍然是镇咳复方中的常用中药。根据《中华人民共和国药典》2010年版一部收载[1]，百部为百部科植物直立百部Stemona
sessilifolia(Miq)Miq.、蔓生百部Stemona japonica(BL.)Miq.或对叶百部Stemona tuberosa Lour.的干燥块根。前期研究发现，百部生物碱是百部主要的镇咳活性成分[2]，镇咳有效部位BB-1(为总生物碱且不含金大刚碱等小毒成分)具有显著的镇咳活性[3]，与传统镇咳药相比，其可针对咳嗽的多种原因进行镇咳，具有高效、低毒的优势。目前，国内外对百部总生物碱药物制剂的研究未见文献报道，本研究在百部总生物碱缓释片工艺研究的基础上，采用SPE-HPLC-ELSD法[4]建立百部总生物碱缓释片中对叶百部碱的含量测定方法，并对其体外释放度[5]进行研究，为建立百部总生物碱缓释片的质量标准，有效控制制剂质量提供参考[6]。
1 仪器与材料
1.1 仪器
1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；2000蒸发光散射检测器(美国奥泰公司)；DK-S22电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)；ZRS-8G智能溶出仪(天大天发科技有限公司)；SB-5200DT超声仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；BP61型电子天平(德国Satorius)；UPT-I-10T超纯水器(成都超纯科技有限公司)；恒温水浴锅(金坛市鸿科仪器厂)。 1.2 材料
百部总生物碱提取物由本课题组提取分离获得；对叶百部碱对照品由本课题组从对叶百部中提取分离获得；百部总生物碱缓释片(自制，批号分别为20141001，20141002，20141003)；乙腈为色谱纯(上海纯晶实业有限公司)；3 mL×500 mg固相萃取柱(美国色谱科技公司)；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 对叶百部碱薄层色谱鉴别
精密称取对叶百部碱对照品适量，置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成对照品溶液。取10粒百部总生物碱缓释片，快速研匀后，精密称定1.0 g，加入50 mL 50%甲醇，超声溶解，过滤，滤饼用5 mL 50%甲醇洗涤，合并滤液和洗液，并转移至已处理好的C18固相萃取小柱中，先用5 mL水洗脱，再用5 mL甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，转移至25 mL的容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密量取甲醇溶液1.0 mL至25 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，即得供试品溶液。
依照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取2.1中对照品溶液和供试液各2 μL，在同一硅胶G薄层板上点样，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(16∶4∶1)为展开剂，取出，吹干，再均匀喷上0.5%茚三酮溶液，150 ℃加热2 min，至斑点显色明显后，再置碘蒸气中熏至斑点清晰。见图1。在薄层板对叶百部碱斑点的相应位置上显相同颜色的斑点(为保证实验准确性，供试品平行点样3次)。 2.2 百部总生物碱缓释片的含量测定
本文根据前期研究发现，百部总生物碱中对叶百部生物碱含量高且稳定，可以作为百部总生物碱的一个代表性含量检测指标，所以在接下来百部总生物碱缓释片含量及释放度测定中均以对叶百部碱为代表物进行检测。
2.2.1 液相色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax Extend-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.12%三乙胺溶液(40∶60)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃；进样量：30 μL；ELSD参数：漂移管温度为97 ℃；空气流速为3 mL·min-1。
百部总生物碱缓释片的质量标准研究
