旗开得胜 第5章：研究方法-基因克隆 导言：克隆技术 克隆的现代含义 基因克隆 基因克隆策略 基因克隆相关技术 Clone 翻译过来 克隆 “Clone”起源于希腊文“Klone”，原意： 用“嫩枝”或“插条”繁殖。 最初意义 无性繁殖 现代意义 两个词性、三层含义 动词，通过某种操作比如显微操作、分子生 物学操作来获得与某种祖先相同的分子、 细胞、个体的过程。 名词，通过上述操作获得的遗传上与祖先相 同的分子、细胞、个体。 踏实为学 诚信为人 坚守道德 守住底线 1
5.5基因文库的筛选 当作名词时，克隆是指由遗传组成完全相同的分子、细胞或个体组成的一个群体。例如， DNA分子克隆或基因克隆是指核苷酸序列相同的一群DNA分子或基因拷读万卷书 行万里路
旗开得胜 贝； 细胞克隆则是来源于同一祖细胞的、基因型完全相同的一群子细胞； 个体克隆则是指基因型相同的个体的拷贝。 当作动词是指运用DNA重组技术将一个特定的基因或DNA序列输入一个载体分子；也指分离出单个分子、基因或细胞后使之增殖成一个群体，当然也包括复制个体的一系列实验操作。 在分子生物学中特指基因克隆（gene cloning） 指的是从基因组中把某个基因分离出来，再把它重组在合适的载体上，使之增殖成许多拷贝的过程。 这里面含有几层意思： 1、要知道这个基因的序列如何； 2、要搞清楚这个基因位于基因组那条染色体上，位置关系如何； 3、要把这个基因的序列放置在某种载体分子上以便能够获得它的多个拷贝。 2
5.5 基因克隆（gene cloning） 指的是从基因组中把某个基因分离出来，再把它重组在合适的载体上，使之增殖成许多拷贝的过程。 基因克隆（gene cloning）是指某种目的基因的分离过程，通常是从基因组或DNA大片段中分离并获得某一特定的基因或DNA片段，再通过DNA 序列扩增形成由众多拷贝组成的DNA拷贝群体的过程。 读万卷书 行万里路
旗开得胜 几层意思： 1、要知道这个基因的序列如何； 2、要搞清楚这个基因位于基因组那条染色体上，位置关系如何； 3、把这个基因的序列放置在某种载体分子上以便能够获得它的多个拷贝 基因克隆的一般策略 已知基因的DNA全部或部分DNA序列一般采用（功能可能已知）PCR技术或已知其它物种的同类基因的DNA序列探针分子（功能可能已知）杂交技术已知目的基因cDNA全部或部分序列已知目的基因表达产物蛋白等序列功能克隆策略有差异表达的目的基因目的基因表达具有组织、器官等时空差异性随机引物多态性扩增技术，定向引物扩增技术和DDRT-PCR、SSH-PCR、RAP-PCR、DNA-RDA、cDNA捕捉法差异筛选法、差减杂交（SH）、mRNA差别显示技术（DDRT-PCR）、代表性差异分析（RAD）、抑制型差减杂交（SSH）已知基因的序列目的基因未知基因的序列表型克隆策略已有基因图位或标记、转座子等无差异表达的目的基因用转座子标签法、T-DNA标签法及图位克隆技术文库筛选法、功能蛋白分离法即直接测序等进行，是难度较大较繁琐的策略定位克隆策略 反向遗传学侯选定位克隆策略 补充 总结 3
1 已知序列基因的克隆 概述： 对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取,即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。 现在国际上公开发行的杂志一般都不登载整个基因序列,而要求作者在投稿之前将文章中所涉及的基因序列在基因库中注册,拟发表的文章中仅提供该基因读万卷书 行万里路
【分子生物学 山西师范】分子生物学-11-1-第五章基因克隆技术
