超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒产品说明书(中

超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

超氧化物歧化酶（Superoxide ismutase，SOD）标准曲线测定试剂是一种旨在通过比色测定高度可溶性的四唑盐在超氧化物阴离子的还原作用下产生的水溶性甲臢染料所获得的吸光值，来对应构建已知超氧化物岐化酶活性单位标准曲线的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞和组织样品中超氧化物歧化酶实际活性单位计算的参照依据。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

超氧化物岐化酶（SOD），是体内的重要金属酶抗氧化剂，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢（H2O2）和分子氧（O2）。超氧化物歧化酶活性检测试剂使用高度水溶性的四唑盐:WST-1[（2-（4-Iodophenyl）-3- （4-nitrophenyl）-5-（2,4-disulfophenyl）-2H-tetrazolium，monosodium salt）；2-(4–碘苯基)-3-（4–硝基苯基）-5-（2,4-苯二磺酸）-2H-四唑单钠盐]。WST-1灵敏度高，氧化态的吸光度低，呈浅黄色，水溶性好，可以100%被SOD抑制，检测不受pH影响，背景噪音低。WST-1被O2还原（呈现深黄色）的还原率和黄嘌呤氧化酶的活性成线性关系，该反应能被超氧化物岐化酶（SOD）抑制（完全抑制，WST-1呈现无色）。利用SOD能抑制WST-1和O2的氧化还原能力来测定SOD的活性（波长为450nm的比色分析）。

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产品内容

反应液（Reagent A） 染色液（Reagent B） 催化液（Reagent C） 稀释液（Reagent ） 补充液（Reagent E） 标准液（Reagent F） 产品说明书

10毫升 50微升 25微升 2毫升

1毫升 200微升 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里； 染色液（Reagent B），避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器 2.2毫升离心管：用于反应液配制的容器 酶标板或比色皿：用于比色分析的容器 酶标仪或分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出2毫升 反应液（Reagent A）到新的2.2毫升离心管，加入10微升 染色液（Reagent B），轻柔混匀后，置于暗室里，标记为 染色工作液。然后移出200微升 稀释液（Reagent ）到新的1.5毫升离心管，加入5微升 催化液（Reagent C），轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为 催化工作液。然后进行下列操作。

一、 二倍法系列稀释

1． 设定好酶标仪并预热：波长450nm

2． 取出待测的 标准液（Reagent F），置于冰槽里 3． 准备1个96孔板，做好1至5号标记，置于冰槽里

4． 按下列顺序依次加入下列反应液到96孔板的标记样品孔里： 1） 分别移取20微升 稀释液（Reagent ）到96孔板的2至5号孔里 2） 移取40微升 标准液（Reagent F）到96孔板的1号孔里

3） 用200微升枪头抽去20微升1号孔里的 标准液（Reagent F）到96孔板的2号孔里 4） 用200微升枪头上下抽吸混匀2号孔

5） 用200微升枪头抽去20微升2号孔里含有 标准液（Reagent F）的稀释液到96孔板的3号孔里 6） 用200微升枪头上下抽吸混匀3号孔

7） 用200微升枪头抽去20微升3号孔里含有 标准液（Reagent F）的稀释液到96孔板的4号孔里 8） 用200微升枪头抽去20微升4号孔里含有 标准液（Reagent F）的稀释液，扔掉 9） SOD实际浓度见下表

管号 稀释液（Reagent ） 1 2 3 4 5

二、 建立反应体系

1． 分别加入200微升含有 反应液（Reagent A）和 染色液（Reagent B）的 染色工作液到96孔板的

1至5号孔里

2． 分别加入20微升含有 催化液（Reagent C）和 稀释液（Reagent ）的 催化工作液到96孔板的

1至10号孔里

三、 标准样品测定

1． 轻轻摇动96孔板，混匀反应液

2． 放进37℃培养箱孵育20分钟，避免光照 3． 即刻放进酶标仪检测，波长为450nm

四、 构建SOD标准曲线

0微升 20微升 20微升 20微升 20微升 标准液（Reagent F） 40微升 20微升1号管 20微升2号管 20微升3号管 0 SOD浓度 （单位/毫升） 12 6 3 1.5 0

1． 横座标（x轴）为每毫升SOD单位浓度

2． 纵坐标（y轴）为标准样品读数（吸光单位OD值） 3． 根据测得数据构建曲线

注意事项

1． 本产品为5次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 操作时，须在4℃下进行

4． 染色液（Reagent B）为浅黄色，如果有结晶析出，放进37℃温育数分钟即可。 染色液（Reagent

B）一旦被还原，呈现可见黄色或深黄色；如果含有SOD，则会呈现为无色 5． 孵育时，避免光照 6． 孵育后即刻比色测定

7． 样品SOD实际活性单位定义：每毫克样品蛋白或每毫升样品含有X单位SOD量

8． 标准液（Reagent F）的活性单位定义为25℃温度，pH7.8的条件下，抑制50%在黄嘌呤氧化酶参与

的反应系统中，WST-1和O2之间的氧化还原能力 9． 本公司提供系列超氧化物歧化酶分析试剂产品

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质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定检测敏感

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